El objetivo de este estudio fue desarrollar una tripsina térmica y operativamente estable mediante su inmovilización covalente en nanopartículas magnéticas de quitosano (Fe3O4 @CTS). La preparación satisfactoria de las nanopartículas de Fe3O4 @CTS se verificó mediante espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (FTIR), espectroscopia de fotoelectrones de rayos X (XPS), difracción de rayos X (XRD) y microscopia electrónica de transmisión (TEM), que indicaron que las nanopartículas de Fe3O4 @CTS preparadas tienen propiedades superparamagnéticas, con un tamaño medio de aproximadamente 17 nm. A continuación, se inmovilizó covalentemente la tripsina en las nanopartículas de Fe3O4 @CTS con una alta capacidad de carga (149,25 mg/g). Los datos de FTIR demostraron que la tripsina había sufrido un cambio conformacional en comparación con la tripsina libre, y la constante de Michaelis (Km) y la velocidad máxima de reacción de hidrólisis (Vmax) mostraron que la tripsina inmovilizada en el Fe3O4 @CTS tenía una menor afinidad por la BAEE y una menor actividad en comparación con la tripsina libre. Sin embargo, la tripsina inmovilizada mostró una mayor actividad que la tripsina libre a pH 6,0 y en condiciones alcalinas y retuvo más del 84% de su actividad inicial a 60°C tras 8 horas de incubación. Su excelente rendimiento en un rango de pH más amplio y su elevada estabilidad térmica, así como su eficaz hidrólisis de la albúmina de suero bovino (BSA) y su reutilización, la hacen más atractiva que la tripsina libre para su aplicación en la digestión de proteínas.
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