Resumen

Nuestro conocimiento del género Natrinema es actualmente limitado debido a la falta de herramientas genéticas disponibles. Los marcadores auxotróficos se han utilizado ampliamente para construir sistemas genéticos en bacterias y eucariotas y en algunas especies arqueas. Aquí, aislamos cuatro mutantes auxotróficos de Natrinema sp. J7-2, mediante mutagénesis de 1-metil-3-nitro-1-nitroso-guanidina, y los designamos como J7-2-1, J7-2-22, J7-2-26 y J7-2-52, respectivamente. Se determinó que los fenotipos mutantes eran auxotróficos para leucina (J7-2-1), arginina (J7-2-22 y J7-2-52) y lisina (J7-2-26). El genoma completo y las vías biosintéticas de los aminoácidos en J7-2 identificaron que el fenotipo auxotrófico de tres mutantes se debía a mutaciones genéticas en leuB (J7-2-1), dapD (J7-2-26) y argC (J7-2-52). Estos fenotipos auxotróficos se emplearon como marcadores seleccionables para establecer un método de transformación. Se determinó que las eficiencias de transformación eran de aproximadamente 103 transformantes por µg de ADN. Y las cepas J7-2-1 y J7-2-26 se transformaron en cepas prototróficas con el ADN genómico de tipo salvaje, fragmentos amplificados de los genes correspondientes o los plásmidos integradores que llevan los genes correspondientes. Además, los genes exógenos, bgaH o amyH, se expresaron con éxito en J7-2-1. Así, hemos desarrollado un sistema de manipulación genética para el género Natrinema basado en los mutantes auxotróficos aislados de Natrinema sp. J7-2.

• Materias:Células Enzimas Minería Minas y minería metanogénico Ecología
• Subjects:Cells Enzymes Mining Mines and mining methanogenic Ecology
• Palabras claves:j7, mutante de natrinema, fenotipo auxotrófico, natrinema sp, mutante auxotrófico aislado, genómico de tipo salvaje, sistema de manipulación genética, herramientas genéticas disponibles, adn genómico de tipo, mutación genética
• Keywords:j7, mutant of natrinema, auxotrophic phenotype, natrinema sp, isolated auxotrophic mutant, wild type genomic, genetic manipulation system, available genetic tools, type genomic dna, gene mutation