Resumen

Presentamos la caracterización funcional y estructural de la primera aldehído deshidrogenasa termoestable dependiente de NADP AlDHPyr1147. In vitro, AlDHPyr1147 cataliza la oxidación irreversible de aldehídos alifáticos cortos a 60-85°С, y la afinidad de AlDHPyr1147 al NADP a 60°С es comparable a la de los análogos mesófilos a 25°С. Determinamos las estructuras de la forma apo de AlDHPyr1147 (con una resolución de 3,04 Å), de tres complejos binarios con la coenzima (1,90, 2,06 y 2,19 Å) y del complejo ternario con la coenzima y el isobutiraldehído como sustrato (2,66 Å). La fracción de nicotinamida de la coenzima está desordenada en los dos complejos binarios, mientras que está ordenada en el complejo ternario, así como en el complejo binario obtenido tras un remojo adicional con el sustrato. Las estructuras de AlDHPyr1147 demuestran el refuerzo del contacto dimérico (en comparación con los análogos) y la flexibilidad conformacional concertada de los catalizadores Cys287 y Glu253, así como de Leu254 y la fracción de nicotinamida de la coenzima. Una comparación de los sitios activos de la AlDHPyr1147 y de las deshidrogenasas caracterizadas anteriormente sugiere que los sistemas de relevo de protones, que se propusieron previamente para las deshidrogenasas de esta familia, están bloqueados en la AlDHPyr1147, y la liberación de protones en esta última puede ocurrir a través del canal de sustrato.

• Materias:Enzimas Microbiología Aguas residuales Arqueas metanogénico
• Subjects:Enzymes Microbiology Sewage Archeas methanogenic
• Palabras claves:complejo binario, coenzima, fracción de nicotinamida, complejo ternario, aldehído deshidrogenasa dependiente, sitio de aldhpyr1147, afinidad de aldhpyr1147, aldehído alifático corto, flexibilidad conformacional concertada, sistema de relevo de protones
• Keywords:binary complex, coenzyme, nicotinamide moiety, ternary complex, dependent aldehyde dehydrogenase, site of aldhpyr1147, affinity of aldhpyr1147, short aliphatic aldehyde, concerted conformational flexibility, proton relay system