Resumen

En las células de mamíferos, las roturas de doble cadena del ADN (DSB) se reparan principalmente mediante la unión de extremos no homólogos (NHEJ). El modelo actual sugiere que el heterodímero Ku 70/80 se une a los extremos DSB y recluta a DNA-PKcs para formar la proteína quinasa dependiente de ADN activa, DNA-PK. Posteriormente, XRCC4, la ADN ligasa IV, XLF y, muy probablemente, otros componentes no identificados participan en el paso final de ligación del DSB. Por lo tanto, la DNA-PK desempeña un papel clave en NHEJ debido a sus funciones estructurales y reguladoras que median en la unión del extremo DSB. Sin embargo, estudios recientes demuestran que también existen otras vías de NHEJ independientes de la DNA-PK. Desafortunadamente, la presencia de DNA-PKcs parece inhibir la NHEJ independiente de DNA-PK, y el análisis in vitro de la NHEJ independiente de DNA-PK en presencia de la proteína DNA-PKcs sigue siendo problemático. Hemos desarrollado un ensayo in vitro que es preferentemente activo para la reparación DSB independiente de DNA-PK basado únicamente en sus condiciones de reacción, facilitando el análisis bioquímico diferencial coincidente de las dos vías. Los resultados indican la naturaleza bioquímicamente distinta de los mecanismos de unión de extremos representados por los ensayos NHEJ dependiente e independiente de DNA-PK, así como las diferencias funcionales entre ambas vías.

• Materias:Pliegue de Proteína Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Ácidos nucleicos Reparación del ADN Daño del ADN
• Subjects:Protein Folding Polymerase chain reaction Nucleic acids DNA Repair DNA Damage
• Palabras claves:dna, nhej independiente, análisis bioquímico diferencial coincidente, paso final de ligación dsb, ensayos nhej independientes, dna ligasa iv, proteína quinasa dependiente, reparación dsb independiente, vías nhej independientes, otros componentes no identificados
• Keywords:dna, independent nhej, coincident differential biochemical analysis, final dsb ligation step, -independent nhej assays, dna ligase iv, dependent protein kinase, independent dsb repair, independent nhej pathways, other unidentified components