Resumen

Este estudio sienta las bases de un método nuevo y sencillo para el cribado por LC/MS/MS de aductos proteicos N-terminales. Este procedimiento se denomina "procedimiento FIRE", ya que el isotiocianato de fluoresceína (FITC) proporcionó una sensibilidad superior por LC/MS/MS al medir los aductos (R) de los compuestos electrófilos con un procedimiento Edman modificado. Los principios del procedimiento FIRE son que los aductos a los aminoácidos N-terminales se desprenden selectivamente y se miden a partir de las proteínas después de la derivatización mediante reactivos de isotiocianato Edman. En este estudio, se utilizaron FITC, 4-N,N-dimetilaminoazobenceno 4′-isotiocianato (DABITC) y 4-dimetilamino-1-naftil isotiocianato (DNITC) para sintetizar analitos de tiohidantoína a partir de valina y N-metilvalina. La sensibilidad por LC/MS/MS aumentó hasta tres órdenes de magnitud en comparación con el isotiocianato de fenilo y más en comparación con el isotiocianato de pentafluorofenilo. El reactivo FITC permitirá realizar mediciones de bajos niveles de aductos de fondo. Los analitos sintetizados se caracterizaron con, por ejemplo, RMN H1, RMN C13, LC/MS/MS y UV.

• Materias:Cinética química Reacciones químicas Cinética Química farmacéutica Método espectrofotométrico
• Subjects:Chemical kinetics Chemical reactions Kinetics Chemistry pharmaceutical Spectrophotometric method
• Palabras claves:lc, reactivo edman de isotiocianato, orden de magnitud, nivel de aducto de fondo, aminoácido terminal, procedimientos edman modificados, reactivo fitc, isotiocianato de pentafluorofenilo, cribado basado, sensibilidad superior
• Keywords:lc, isothiocyanate edman reagent, order of magnitude, background adduct level, terminal amino acid, modified edman procedures, fitc reagent, pentafluorophenyl isothiocyanate, based screening, superior sensitivity