Resumen

La enzima cloroperoxidasa (CPO) se inmovilizó en perlas de sol-gel de sílice preparadas a partir de tetrametoxisilano. El diámetro medio de los poros de la estructura huésped de sílice (~3 nm) era menor que el diámetro globular de la CPO (~6 nm) y la enzima permaneció atrapada tras la maduración sol-gel. El rendimiento catalítico de la enzima atrapada se evaluó mediante la reacción de peroxidación del pirogalol. Las perlas de sol-gel cargadas con 4 μg de CPO por mL de solución de sol alcanzaron una actividad relativa del 9-12% en comparación con la CPO libre en solución. El análisis cinético de la enzima reveló una disminución en kcat pero ningún cambio en KM o KI. Por tanto, la liberación de producto o el daño enzimático podrían limitar el rendimiento catalítico. Sin embargo, el dicroísmo circular y los espectros de absorción visible de las láminas transparentes de sol-gel de CPO no indicaron daños en la enzima. La disminución de la actividad debida a la exposición al metanol demostró ser reversible en solución. Para mejorar el rendimiento catalítico se modificó el protocolo sol-gel. La incorporación de 5, 20 o 40% de metiltrimetoxisilano dio lugar a perlas de sol-gel más quebradizas, pero el rendimiento catalítico aumentó hasta un 14% en relación con el CPO libre en solución. El uso de tampones de colada más ácidos (pH 4,5 o 5,5 en lugar de 6,5) dio lugar a un huésped de sílice más poroso que alcanzó hasta un 18% de actividad relativa.

• Materias:Biotecnología Nanotecnología Fotocatálisis Nanopartículas Nanoestructuras
• Subjects:Biotechnology Nanotechnology Photocatalysis Nanoparticles Nanostructures
• Palabras claves:rendimiento catalítico, microesferas de gel, solución, daño enzimático, cpo libre, actividad relativa, análisis cinético enzimático, tampones de colada ácidos, diámetro medio de los poros, diámetro cpo globular
• Keywords:catalytic performance, gel beads, solution, enzyme damage, free cpo, relative activity, enzyme kinetic analysis, acidic casting buffers, average pore diameter, globular cpo diameter