Resumen

Las endoisopeptidasas de pseudomureína causan la lisis de las paredes celulares de los metanógenos al escindir el enlace isopéptido Ala-ε-Lys en la cadena peptídica de la pseudomureína. PeiW y PeiP son dos endoisopeptidasas de pseudomureína termoestables codificadas por el fago ΨM100 de Methanothermobacter wolfei y los fagos ΨM1 y ΨM2 de Methanothermobacter marburgensis, respectivamente. Se desarrolló un ensayo continuo utilizando sustratos peptídicos sintéticos y se utilizó en la caracterización bioquímica de PeiW y PeiP recombinantes. Las ventajas de estos sustratos peptídicos sintéticos sobre los naturales son la sensibilidad, la alta pureza y la caracterización y el hecho de que son más fáciles de obtener que los sustratos naturales. En presencia de un agente reductor, el PeiW y el PeiP purificados mostraron una actividad similar en condiciones aeróbicas y anaeróbicas. Ambas enzimas requerían un metal divalente para su actividad y mostraron una mayor termoestabilidad en presencia de Ca2 . PeiW y PeiP implican un residuo de cisteína en la catálisis y tienen una conformación nativa monomérica. Se determinaron los parámetros cinéticos, KM y kcat, y se confirmó que el enlace ε-isopeptídico entre la alanina y la lisina es el enlace lisado por estas enzimas en la pseudomureína. El nuevo ensayo puede tener aplicaciones más amplias para el estudio general de las peptidasas y la identificación de metanógenos específicos susceptibles de ser lisados por endoisopeptidasas específicas de la pseudomureína.

• Materias:Células Enzimas Minería Minas y minería metanogénico Ecología
• Subjects:Cells Enzymes Mining Mines and mining methanogenic Ecology
• Palabras claves:sustrato peptídico sintético, sustrato natural, cadena de pseudomureína, conformación nativa monomérica, pared del metanógeno, presencia de ca2, endoisopeptidasas de pseudomureína termoestables, estudio de la peptidasa, endoisopeptidasas de pseudomureína específicas, enlace isopéptido ala
• Keywords:synthetic peptide substrate, natural substrate, chain of pseudomurein, monomeric native conformation, wall of methanogen, presence of ca2, thermostable pseudomurein endoisopeptidases, study of peptidase, specific pseudomurein endoisopeptidases, isopeptide bond ala