Resumen

La estructura de las proteínas depende de interacciones débiles y enlaces covalentes, como los puentes disulfuro, establecidos en función de las condiciones ambientales. Aquí presentamos la validación de dos metodologías espectroscópicas para la medición de tioles libres y no oxidados, como atributo de integridad estructural, utilizando ácido 5,5′-ditionitrobenzoico (DTNB) y DyLight Maleimide (DLM) como agentes derivatizantes. Estos métodos se utilizaron para comparar productos de Rituximab y Etanercept de distintos fabricantes. Se demostró la comparabilidad fisicoquímica de los productos de Rituximab, ya que el DTNB no mostró diferencias estadísticas en condiciones nativas, desnaturalizantes y desnaturalizantes-reductoras, con valores P de la prueba t de Student de 0,6233, 0,4022 y 0,1475, respectivamente. Mientras que para los productos de Etanercept no se observaron diferencias estadísticas en condiciones nativas ( P = 0,0758 ) y de desnaturalización ( P = 0,2450 ), las condiciones de desnaturalización-reducción revelaron contenidos de cisteína del 98 y 101%, hacia el valor teórico de 58, para los productos evaluados de diferentes fabricantes de Etanercept. La DLM apoyó la igualdad entre los productos de Rituximab en condiciones nativas ( P = 0,7499 ) y desnaturalizantes ( P = 0,8027 ), pero mostró diferencias estadísticas entre los productos de Etanercept en condiciones nativas ( P < 0,001 ). La DLM sugirió que Infinitam tiene menos tioles expuestos que Enbrel, aunque el método DTNB, el dicroísmo circular (CD), la fluorescencia (TCSPC) y la actividad (neutralización del TNFα) no mostraron diferencias. En general, estos datos revelaron las capacidades e inconvenientes de cada técnica de cuantificación de tioles y su correlación con la estructura de las proteínas.

• Materias:Reacciones químicas Análisis cromatográfico Electroquímica Farmacocinética Análisis espectroquímico
• Subjects:Chemical reactions Chromatographic analysis Electrochemistry Pharmacokinetics Spectrochemical analysis
• Palabras claves:productos etanercept, diferencias estadísticas, condiciones, dlm, productos rituximab, -test p valores, diferentes fabricantes etanercept, técnica de cuantificación de tioles, dtnb, método dtnb
• Keywords:etanercept products, statistical differences, conditions, dlm, rituximab products, -test p values, different etanercept manufacturers, thiol quantification technique, dtnb, dtnb method