Resumen

Las ERO inducidas por el estrés modifican los patrones de metilación del ADN. Se desarrolló un protocolo que combina la digestión con metilación sensible a la endonucleasa de restricción (MS-RE) con la hibridación sustractiva de supresión (SSH) para construir la biblioteca sustractiva de metilación diferencial para encontrar genes regulados por el mecanismo de metilación bajo estrés por frío. La eficiencia total de la detección de fragmentos diana fue del 74,64%. El análisis de metilación del ADN demostró que el estado de metilación de los fragmentos diana cambiaba tras el tratamiento a baja temperatura o con inhibidores de la metiltransferasa del ADN. El análisis del nivel de transcripción indicó que la desmetilación del ADN promueve el nivel de expresión génica. Los resultados demostraron que nuestro protocolo era fiable y eficaz para obtener fragmentos de genes en estado de metilación diferencial.

• Materias:Reacciones químicas Electroquímica Biología molecular Química farmacéutica Química analítica
• Subjects:Chemical reactions Electrochemistry Molecular biology Chemistry pharmaceutical Analytical chemistry
• Palabras claves:estado de metilación, tratamiento con inhibidores de la adn metiltransferasa, análisis de la metilación del adn, patrones de metilación del adn, análisis del nivel de transcripción, nivel de expresión génica, endonucleasa de restricción sensible, metilación, protocolo, estrés por frío
• Keywords:methylation status, dna methyltransferase inhibitor treatment, dna methylation analysis, dna methylation patterns, transcription level analysis, gene expression level, sensitive restriction endonuclease, methylation, protocol, cold stress