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Frontal Cryosectioning: An Improved Protocol for Sectioning Large Areas of Fibrous ScaffoldsCriosección frontal: Un protocolo mejorado para seccionar grandes áreas de andamios fibrosos

Resumen

Los andamiajes fibrosos de ingeniería tisular, como los producidos por electrospinning, no pueden alcanzar su potencial clínico hasta que se comprendan las interacciones profundas entre las células y los andamiajes. Incluso las técnicas de imagen más avanzadas se limitan a captar datos a profundidades de 100 µm debido a la dispersión de la luz asociada a las fibras que componen estos andamiajes. Los análisis convencionales de secciones transversales proporcionan información sobre volúmenes de espacio relativamente pequeños y las secciones frontales son difíciles de generar. El conocimiento actual de la penetración celular en los andamiajes fibrosos se limita predominantemente a la superficie del andamiaje. Aunque se dispone de cierta información a partir de secciones transversales, la calidad de éstas varía, pueden distorsionar las propiedades espaciales de los andamiajes y prácticamente no ofrecen pistas espaciales sobre qué propiedades de los andamiajes instigan respuestas celulares específicas. Sin la capacidad definitiva de comprender cómo interactúan las células con la arquitectura de todo un andamio, es difícil justificar las modificaciones de los andamios o los análisis en profundidad de la penetración celular hasta que se desarrollen las técnicas adecuadas. Para abordar esta limitación, hemos desarrollado un protocolo de criosección que permite obtener secciones frontales seriadas de andamios electrospun. A continuación, se utilizaron imágenes microscópicas ensambladas en imágenes de montaje a partir de secciones seriadas para crear modelos tridimensionales (3D) de la infiltración celular en todo el andamiaje.

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