Resumen

Objetivo. Establecer y validar un método sencillo, sensible y rápido de cromatografía líquida y espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) para la determinación de metotrexato (MTX) y su principal metabolito 7-hidroxi-metotrexato (7-OH-MTX) en plasma humano. Método. La separación cromatográfica se logró en una columna Zorbax C18 (3,5 μm, 2,1 × 100 mm) utilizando una elución en gradiente con metanol (fase B) y solución acuosa de ácido 0,2 mormico (fase A). El caudal fue de 0,3 mL/min con un tiempo analítico de 3,5 min. La detección por espectrometría de masas se llevó a cabo en un espectrómetro de masas en tándem triple cuádruple en modo de iones positivos con las siguientes transiciones de masa: m/z 455,1/308,1 para MTX, 471,0/324,1 para 7-OH-MTX y 458,2/311,1 para el estándar interno. El procedimiento de pretratamiento se optimizó con la dilución después de la precipitación de proteínas en un paso. Resultados. El rango de calibración de metotrexato y 7-OH-MTX fue de 5,0-10000,0 ng/mL. La precisión y exactitud intradiaria e interdiaria fueron inferiores a 15 y dentro de ±15 para ambos analitos. La recuperación de MTX y 7-OH-MTX fue superior al 90 y el efecto de la matriz osciló entre el 97,90% y el 117,60%. Conclusión. El método se desarrolló y aplicó con éxito a la monitorización terapéutica rutinaria de MTX y 7-OH-MTX en plasma humano.

• Materias:Cinética química Química farmacéutica Análisis químico Método espectrofotométrico
• Subjects:Chemical kinetics Chemistry pharmaceutical Chemical test Spectrophotometric method
• Palabras claves:mtx, plasma humano, espectrometría de masas en tándem, modo de iones positivos, seguimiento de mtx, masa cuádruple en tándem, precipitación de proteínas por pasos, determinación de metotrexato, detección por espectrometría de masas, rango de metotrexato
• Keywords:mtx, human plasma, tandem mass spectrometry, positive ion mode, monitoring of mtx, quadruple tandem mass, step protein precipitation, determination of methotrexate, mass spectrometry detection, range of methotrexate