Resumen

En este estudio, se estableció un inmunoensayo de quimioluminiscencia (CLIA) para la 25-hidroxivitamina D (25(OH)D) en suero humano mediante un modelo de competencia. En suero, más del 99% del total de 25(OH)D circulante se une a proteínas y menos del 1% de 25(OH)D está en forma libre (Jassil et al., 2017). Antes de medir la concentración de 25(OH)D en suero, debe realizarse un procedimiento de liberación. Se utiliza un nuevo reactivo para liberar la 25(OH)D ligada a la forma libre. La estreptavidina (SA) se marcó en perlas magnéticas mediante un método de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida/N-hidroxisuccinimida (EDC/NHS). La VD biotinilada se utilizó como competidor de la 25(OH)D en las muestras. El anticuerpo anti-VD (aby) se marcó con peroxidasa de rábano picante (HRP) mediante EDC para reaccionar con las moléculas de 25(OH)D y VD biotinilada. Las muestras pretratadas o los estándares se añadieron al tubo de reacción con biotina-VD y aby-HRP anti-VD, la 25(OH)D libre de la muestra compite con la VD biotinilada para unirse a la aby-HRP anti-VD, se añade una partícula magnética marcada con SA para aislar el complejo generador de señal, y la señal es inversamente proporcional a la concentración de 25(OH)D en la muestra. El método establecido muestra buena termoestabilidad y rendimiento. El límite de detección (LoD) es de 1,43 ng/mL. El coeficiente de variación (CV) intraensayo es del 3,66%-6,56%, el CV interensayo es del 4,19%-7,01%, y la tasa de recuperación es del 93,22%-107,99%. La reactividad cruzada (RC) fue notablemente baja con la vitamina D2, la vitamina D3, la 1, 25-dihidroxivitamina D3 y la 1, 25-dihidroxivitamina D2. Al mismo tiempo, los valores de reacción cruzada con la 25-hidroxivitamina D2 y la 25-hidroxivitamina D3 fueron del 97 y 100%, respectivamente. El método desarrollado muestra una buena correlación con el producto VD total de Roche y DiaSorin. En este estudio se midieron 1096 muestras de pacientes clínicos con el kit de reactivos desarrollado. Se trataba de 7 tipos de enfermedad, y la concentración de 25(OH)D es inferior a 30 ng/mL en el 94,98% de los pacientes.

• Materias:Análisis cromatográfico Electroquímica Análisis químico Farmacocinética Análisis espectroquímico
• Subjects:Chromatographic analysis Electrochemistry Chemical test Pharmacokinetics Spectrochemical analysis
• Palabras claves:hrp, concentración, método, vd aby, forma libre, muestras de pacientes clínicos, producto vd total, edc, muestra, suero
• Keywords:hrp, concentration, method, vd aby, free form, clinical patient samples, total vd product, edc, sample, serum