Resumen

Las proteínas PEGiladas o modificadas con polietilenglicol se han utilizado como agentes terapéuticos en diferentes enfermedades. Sin embargo, el mayor inconveniente en su obtención es el proceso de purificación para separar las proteínas que no reaccionan y las especies PEGiladas. Se han realizado varios esfuerzos para separar las reacciones de PEGilación por cromatografía utilizando diferentes fases estacionarias y soportes modificados. En este contexto, este estudio presenta el uso de monolitos cromatográficos modificados con polietilenglicol (PEG) para separar la Ribonucleasa A (RNasa A) PEGilada. Para ello, los discos monolíticos de etilendiamina (EDA) de Convective Interaction Media (CIM) fueron pEGilados utilizando tres pesos moleculares de PEG (1, 10 y 20 kDa). Los monolitos PEGilados se utilizaron para separar la RNasa A modificada con tres pesos moleculares de PEG (5, 20 y 40 kDa) mediante cromatografía de interacción hidrofóbica. Los resultados del rendimiento mostraron que la albúmina de suero bovino (BSA) puede unirse a los monolitos PEGilados y que la cantidad de BSA unida aumenta cuando se incrementa la concentración de sulfato de amonio y la velocidad de flujo. Además, cuando la RNasa A PEGilada se cargó en los monolitos PEGilados, las interacciones PEG-PEG predominaron en la separación de las diferentes especies PEGiladas (es decir, mono y di-PEGiladas). También se observó que el peso molecular de las cadenas de PEG injertadas al monolito impacta fuertemente en la resolución de la operación. Curiosamente, fue posible separar, por primera vez, los isómeros de la RNasa A de 40 kDa injertada con PEG por cromatografía de interacción hidrofóbica. Esta tecnología, basada en monolitos PEGilados, representa una nueva metodología para separar eficientemente proteínas y proteínas PEGiladas. Además, podría utilizarse para separar otras moléculas PEGiladas de interés biofarmacéutico o biotecnológico.

• Materias:Polímeros Industria del caucho Agua Caucho Hidrogeles
• Subjects:Polymers caucho industry Water Rubber Hydrogels
• Palabras claves:monolito pegilado, cromatografía de interacción hidrofóbica, rnasa pegilada, peso molecular, polietilenglicol, medio de interacción convectiva, albúmina de suero bovino, diferentes especies pegiladas, kda, aumento de bsa ligada
• Keywords:pegylated monolith, hydrophobic interaction chromatography, pegylated rnase, molecular weight, polyethylene glycol, convective interaction media, bovine serum albumin, different pegylated species, kda, bound bsa increase