Resumen

La afinidad de un aptámero de unión a trombina sustituido por 8-bromodesoxiguanosina (8-BrdG-) (TBA-Br), cuyos residuos de guanosina 1º y 10º han sido sustituidos por 8-BrdG, se estimó mediante espectroscopia de interferencia reflectométrica (RIfS). Al comparar la TBA-Br con la TBA no modificada (TBA-H), se demostró que la modificación mejoraba eficazmente la afinidad de la TBA; las constantes de disociación (KD) de la TBA-H y la TBA-Br fueron de 45,4 nM y 1,99 nM, respectivamente. Estos valores, obtenidos por observación directa de la unión a trombina mediante RIfS, tienen el mismo orden de magnitud que los obtenidos en nuestro estudio anterior utilizando cambios conformacionales en TBA para detectar la unión a trombina, confirmando así la validez de los valores de KD obtenidos. Las mediciones RIfS también revelaron que la modificación 8-BrdG dio lugar a una menor constante de velocidad de disociación (kd), lo que sugiere que la mejora de la afinidad puede atribuirse a la estabilización de la estructura G-cuadruplex al introducir 8-BrdG.

• Materias:Ingeniería genética Ácido desoxirribonucleico (ADN) Ácido ribonucleico (ARN) Pliegue de Proteína Genómica
• Subjects:Genetic engineering Deoxyribonucleic acid (DNA) Ribonucleic acid (RNA) Protein Folding Genomics
• Palabras claves:tba, afinidad, 10 residuos de guanosina, menor tasa de disociación, espectroscopia de interferencia reflectométrica, rifs, trombina, modificación brdg, valores kd, mediciones rifs
• Keywords:tba, affinity, 10th guanosine residues, lower dissociation rate, reflectometric interference spectroscopy, rifs, thrombin, brdg modification, kd values, rifs measurements