Resumen

En el presente trabajo se verificó la presencia de algunas enzimas relacionadas con la pared celular vegetal (poligalacturonasa, pectato liasa, proteasa y xilanasa) en raíces de clavel (Dianthus caryophyllus L.). Así mismo, se determinaron los niveles de actividad de las mismas. Estos niveles se analizaron en diferentes espacios celulares: en el fluido intercelular que hace parte del apoplasto, en el simplasto y en el tejido total de las raíces de clavel (apoplasto y simplasto).

Para extraer el fluido intercelular, se ensayaron dos metodologías. Para obtener el contenido intracelular (simplasto) y el extracto total (apoplasto y simplasto) en raíces de clavel se ensayaron tres metodologías que utilizaban como solución i) extractante buffer fosfato, ii) buffer fosfato con PVPP y iii) lavados con acetona a las raíces de clavel, antes de la extracción con buffer fosfatos. Los resultados mostraron el efecto de las diferentes soluciones en las actividades enzimáticas y en el contenido de proteína. Se propuso una de estas metodologías para extraer las cuatro enzimas en un único paso y realizar análisis comparativo de actividad enzimática.

Introducción

Las células de las plantas constan de dos compartimentos separados por una membrana plasmática continua; uno intracelular; conocido como simplasto, y otro extracelular; conocido como apoplasto; compuesto por las paredes celulares; los espacios intercelulares; el fluido intracelular (IFW por sus siglas en inglés), las células muertas vacías de los tubos del xilema y el agua contenida en el mismo (1).

La pared celular de las plantas (PC) determina el tamaño y la forma de las células. Así mismo; constituye el primer obstáculo que los patógenos deben superar para acceder a ésta (2). Es una estructura altamente compleja, compuesta por polisacáridos que comprenden celulosa, hemicelulosa, pectina, proteínas y lignina, entre otras (3). De igual modo, la PC que rodea el protoplasto no es una estructura estática, sino que se remodela y reorganiza durante el crecimiento y desarrollo de la célula. También, la PC se desarticula durante los procesos terminales como absición de órganos y maduración de frutos; es fuente de nutrientes y una barrera que limita el acceso de patógenos al contenido celular (4).

Así, con el fin de tener acceso a la planta; los patógenos secretan numerosas enzimas que degradan la pared celular, y que; en algunos casos,  llegan  a  ser  factores  de  virulencia  (2, 4). En  el  IFW  los patógenos secretan sustancias para colonizar al huésped y se dan los procesos de defensa por parte de las plantas (1, 5). Por tanto, ha sido estudiado para conocer las proteínas presentes; relacionadas y secretadas por la planta y el patógeno en el inicio de una interacción planta-patógeno (5, 6).

• Materias:Enzimas Bioquímica vegetal Bioquímica
• Subjects:Enzymes Plant biochemistry Biochemistry
• Palabras claves:Fluido intercelular, Extracto intracelular, Actividad enzimática, Poligalacturonasa, Pectato liasa, Proteasa, Xilanasa
• Keywords:Intercellular fluid, Intracellular extract, Enzymatic activity, Polygalacturonase, Pectate lyase, Protease, Xylanase