Resumen

La microscopía de formación de imágenes de fluorescencia de duración determinada en el tiempo (FLIM) es una potente técnica para evaluar la bioquímica de células y tejidos. Cuando se aplica a muestras vivas gruesas, se ve obstaculizada por la falta de seccionamiento óptico y la necesidad de adquirir muchas imágenes para una medición precisa de los tiempos de vida de fluorescencia. Aquí, informamos sobre el uso de técnicas de procesamiento para superar estas limitaciones, minimizando el tiempo de adquisición, a la vez que se proporciona seccionamiento óptico. Evaluamos la aplicación de las técnicas HiLo y de determinación rápida del tiempo de vida (RLD) para la medición precisa de los tiempos de vida de fluorescencia con seccionamiento óptico. HiLo proporciona seccionamiento óptico combinando el contenido de alta frecuencia de una imagen estándar, obtenida con iluminación uniforme, con el contenido de baja frecuencia de una segunda imagen, adquirida utilizando iluminación estructurada. Nuestros resultados muestran que HiLo produce seccionamiento óptico en muestras gruesas sin degradar la precisión de los tiempos de vida medidos. También mostramos que la deconvolución de la función de respuesta del instrumento (IRF) puede aplicarse con la técnica RLD en imágenes HiLo, mejorando en gran medida la precisión de los tiempos de vida medidos. Estos resultados abren la posibilidad de utilizar la técnica RLD con fuentes de láser de diodo pulsado para determinar con precisión los tiempos de vida de fluorescencia en el rango de subnanosegundos en muestras multicapa gruesas, siempre que se permita el procesamiento fuera de línea.

• Materias:Señales orofaciales Clasificación del cáncer Terapia de exposición Resonancias magnéticas Medicina de precisión
• Subjects:Orofacial signals Cancer classification Exposure therapy Magnetic resonance imaging Precision medicine
• Palabras claves:seccionamiento óptico, tiempos de vida de fluorescencia, HiLo, técnica RLD, medición precisa, contenido de frecuencia, muestras gruesas, microscopía de formación de imágenes del tiempo de vida de fluorescencia, fuentes láser de diodo pulsado, función de respuesta del instrumento
• Keywords:optical sectioning, fluorescence lifetimes, HiLo, RLD technique, accurate measurement, frequency content, thick samples, fluorescence lifetime imaging microscopy, pulsed diode laser sources, instrument response function