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Enzymatic Digestion and Mass Spectroscopies of N-Linked Glycans in Lacquer Stellacyanin from Rhus verniciferaDigestión enzimática y espectroscopias de masas de glicanos N-ligados en la laca-estacianina de Rhus vernicifera

Resumen

La estelacianina de laca se aisló y purificó a partir de polvo de acetona de laca mediante cromatografías continuas en columna Sephadex utilizando geles Sephadex C-50, DEAE A-50 y C-50. La estelacianina de laca purificada tenía un color azul con una banda principal y tres bandas secundarias en torno a 26 k Dain SDS PAGE. La estelacianina de laca purificada tenía un color azul con una banda principal y tres bandas menores alrededor de 26 k Dain SDS PAGE. Las estelacianinas de laca tratadas con tripsina y quimotripsina se examinaron por LC/MS/MS para determinar tres sitios de N-glicosilación (N28, N60 y N102) y se analizaron posteriormente por MALDI TOF MS, indicando que los glicanos N-ligados estaban unidos a los tres sitios de asparagina (Asn), respectivamente. Además, tras la digestión con tripsina y los tratamientos con PNGasa A y PNGasa F para escindir los glicanos N-ligados de los sitios Asn, se descubrió que la estelacianina de la laca tenía una xilosa que contenía un glicano N-ligado biantenario con fucosilación central que consistía en 13 residuos de azúcar (un glicano N-ligado de tipo complejo) mediante análisis MALDI TOF MS. Se trata del primer informe sobre la estructura de un glicano ligado a N en la estelacianina de la laca.

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