El virus del mosaico del pepino (CMV) es una tremenda amenaza para las hortalizas de todo el mundo, incluido Pakistán. El presente trabajo se llevó a cabo para investigar la variabilidad genética de los aislados de CMV que infectan guisantes y espinacas en la región de Pothwar de Pakistán. Los estudios serológicos realizados durante 2016-2017 revelaron una incidencia global de la enfermedad por CMV del 31,70% en los cultivos de guisantes y espinacas. El ensayo inmunoenzimático de triple anticuerpo en sándwich (TAS-ELISA) reveló que todos los aislados positivos pertenecen al subgrupo II del CMV. Se amplificaron por PCR dos ADNc seleccionados de muestras positivas para ELISA de cada cultivo de guisantes y espinacas (aproximadamente 1.100 pb) y se secuenciaron los correspondientes al gen CP del CMV, que compartían entre sí una identidad nucleotídica del 93,7%. Las secuencias de los aislados de CMV del guisante (AAHAP) y la espinaca (AARS) de Pakistán se enviaron al GenBank con los números de acceso MH119071 y MH119071. MH119071 y MH119073, respectivamente. El análisis BLAST reveló una identidad de secuencia del 93,4% del aislado AAHAP con SpK (KC763473) de Irán, mientras que el aislado AARS compartía la máxima identidad (94,5%) con la cepa 241 (AJ585519) de Australia y se agrupaba con algunos aislados de referencia del subgrupo II de CMV del Reino Unido (Z12818) y EE.UU. (AF127976) en una reconstrucción filogenética de uniones vecinas. Se observó un total de 59 sitios polimórficos (segregantes) (S) con una diversidad de nucleótidos (π) de 0,06218, mientras que no se observó ningún evento INDEL en los aislados paquistaníes. La distancia evolutiva de los aislados pakistaníes de CMV fue de 0,0657 entre sí y de 0,0574-0,2964 con otros aislados de CMV registrados en otras partes del mundo. Se observó un flujo genético frecuente (Fst = 0,30478 <0,33) entre los aislados de CMV paquistaníes y los notificados anteriormente. En el análisis de diferenciación genética, los valores de tres pruebas estadísticas basadas en permutaciones, a saber, Z (84,3011), Snn (0,82456) y Ks* (4,04042), no fueron significativos. El análisis estadístico reveló los valores 2,02535, 0,01468 y 0,71862 de D de Tajima, F* y D* de Fu y Li, respectivamente, lo que demuestra que la población de CMV está sometida a una selección equilibrada.
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