Resumen

Se ha demostrado que un análogo del glutatión (L-γ-glutamil-L-cisteinilglicina, GSH), el UPF1 (O-metil-L-tirosinilglutatión), aumenta la concentración intracelular de glutatión total (tGSH) en células K562. La síntesis de GSH es un proceso de dos pasos que requiere la acción de dos enzimas distintas: la γ-glutamil-cisteína ligasa (GCL) y la glutatión sintetasa (GS). La transcripción de la GCL está controlada por múltiples factores diferentes, entre otros el factor de transcripción Nrf2 (nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2), que bajo estrés oxidativo se transloca al núcleo, donde se une al sitio de unión dedicado-elemento de respuesta antioxidante (ARE). En el presente estudio, investigamos si el aumento observado en la concentración intracelular de tGSH es el resultado de la activación de la proteína Nrf2, un factor de transcripción clave en la respuesta antioxidante celular. Se eligieron dos líneas celulares distintas, la línea celular de hepatocarcinoma humano adherente HepG2 y la línea celular mielógena humana no adherente K562, para establecer si el aumento de tGSH intracelular es una respuesta universal al tratamiento con UPF1. El análisis Western blot demostró que, después de 3 h, el nivel de la subunidad catalítica de GCL (GCLc) en las células HepG2 era superior al de la subunidad modificadora de GCL (GCLm), mientras que en las células K562 no se observó ningún cambio. Después de 24 h, el nivel de GCLc era superior al de GCLm en las células K562, pero no en la línea celular HepG2. El experimento de PCR con transcriptasa inversa demostró que no se encontraron diferencias estadísticamente significativas en los niveles de ARNm de GCLm o GCLc, mientras que la expresión del ARNm de Nrf2 y GS fue elevada en la línea celular K562. Nuestros hallazgos sugieren que el UPF1 muestra propiedades únicas de movilización de los mecanismos de defensa celular contra las especies reactivas del oxígeno, mientras que previamente se ha demostrado que actúa como un potente antioxidante per se.

• Materias:Reacciones químicas Electroquímica Biología molecular Química analítica Química de los alimentos
• Subjects:Chemical reactions Electrochemistry Molecular biology Analytical chemistry Food chemistry
• Palabras claves:gcl, k562, gclm, tgsh intracelular, línea celular de hepatocarcinoma humano adherente hepg2, línea celular mielógena humana no adherente k562, niveles de gclc mrna, línea celular hepg2, análisis western blot, elemento de respuesta antioxidante.
• Keywords:gcl, k562, gclm, intracellular tgsh, adherent human hepatocarcinoma cell line hepg2, nonadherent human myelogenous cell line k562, gclc mrna levels, hepg2 cell line, western blot analysis, antioxidant response element