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The miRNA Pull Out Assay as a Method to Validate the miR-28-5p Targets Identified in Other Tumor Contexts in Prostate CancerEl ensayo de extracción de miARN como método para validar las dianas de miR-28-5p identificadas en otros contextos tumorales en el cáncer de próstata

Resumen

miR-28-5p es un miARN intragénico que está subexpresado en varios tipos de tumores y muestra una actividad supresora tumoral (ST). Habitualmente, las dianas conocidas de miR-28-5p se validan en contextos tumorales específicos, pero no está claro si estas dianas también se regulan en otros tipos de tumores. Con este fin, adoptamos el ensayo de extracción de miARN para capturar las dianas de miR-28-5p en células de cáncer de próstata DU-145 (PCa). En primer lugar, demostramos que miR-28-5p actúa como un TS-miRNA en PCa, afectando a la proliferación celular, la supervivencia y la apoptosis. En segundo lugar, evaluamos el enriquecimiento de las 10 dianas validadas de miR-28-5p en la muestra extraída. Mostramos que E2F6, TEX-261, MAPK1, MPL, N4BP1, y RAP1B pero no BAG1, OTUB1, MAD2L1, y p21 estaban significativamente enriquecidas, sugiriendo que no todas las dianas de miR-28-5p están reguladas por este miARN en el CaP. A continuación, verificamos si las dianas que interactuaban con miR-28-5p estaban reguladas por este miARN. Seleccionamos E2F6, la diana más enriquecida en la muestra extraída, y demostramos que miR-28-5p regulaba a la baja E2F6 a nivel proteico, lo que sugiere que nuestro enfoque fue eficaz. En términos generales, estos resultados apoyan el ensayo de extracción de miARN como un método útil para identificar dianas de miARN en contextos específicos.

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