Resumen

Las características inmunomoduladoras y autorrenovables de las células madre mesenquimales adiposas humanas (hAD-MSC) marcan su importancia en la medicina regenerativa. La interleucina 23 (IL- 23), como citocina proinflamatoria, suprime las células reguladoras T (Treg) y promueve la respuesta de las células T helper 17 (Th17) y T helper 1 (Th1). Esta vía inicia la inflamación y la inmunosupresión en varias enfermedades autoinmunes. El presente estudio pretende producir un receptor señuelo recombinante de IL-23 (RIL-23R) utilizando hAD-MSC como buen candidato para la terapia génica ex vivo con el fin de reducir la inflamación en enfermedades autoinmunes. Las hAD-MSC se aislaron a partir de lipoaspirado y se caracterizaron por diferenciación. Se diseñó y clonó RIL- 23R en un vector lentiviral pCDH-813A- 1. La transducción de hAD-MSCs se realizó a MOI (multiplicidad de infección) = 50 con pCDH- EFI α- RIL- 23R- PGK copGFP. Las expresiones de RIL- 23R y del factor de transcripción de unión a octámeros 4 (OCT- 4) se determinaron mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (real time-PCR). Las propiedades de autorrenovación se ensayaron con OCT- 4. La bioactividad del RIL- 23R diseñado se evaluó mediante la expresión de IL- 17 e IL- 10 en esplenocitos de ratón. La diferenciación celular confirmó el verdadero aislamiento de las hAD-MSC a partir del lipoaspirado. La restricción de la digestión enzimática y la secuenciación verificaron el éxito de la clonación de RIL- 23R en el vector lentiviral CD813A-1. La tasa de transducción positiva de la proteína verde fluorescente (GFP) fue de hasta el 90%, y la PCR en tiempo real mostró el nivel de expresión de RIL-23R. Oct-4 presentaba un patrón de expresión similar en las hAD-MSC no transducidas y en las hAD-MSC transducidas/ RIL-23R, lo que indicaba que el vector lentiviral no afectaba a las características de las hAD-MSC. La disminución de la IL-17 y el aumento de la IL-10 mostraron la correcta actividad de las hAD-MSC transducidas. Los resultados mostraron que las hAD-MSCs/ RIL-23R transducidas, que expresan el receptor señuelo de IL-23, pueden proporcionar un enfoque útil para la investigación básica de la terapia génica celular para trastornos autoinmunes.

• Materias:Biología molecular Genes mitocondriales Células madre Biología celular Citogenética
• Subjects:Molecular biology Mitochondrial genes Stem cells Cell biology Cytogenetics
• Palabras claves:hAD, MSCs, vector lentiviral, IL-, T helper, reacción en cadena de la polimerasa en el tiempo, fines de terapia génica, proteína verde fluorescente, células madre mesenquimales, tasa de transducción positiva.
• Keywords:hAD, MSCs, lentiviral vector, IL-, T helper, time polymerase chain reaction, gene therapy purposes, green fluorescent protein, mesenchymal stem cells, positive transduction rate