Resumen

La RNasa P es una enzima ribonucleoproteica altamente conservada que representa un complejo modelo para entender las interacciones macromoleculares ARN-proteína. La RNasa P arcaica está formada por un ARN y hasta cinco proteínas (Pop5, RPP30, RPP21, RPP29 y RPP38/L7Ae). Cuatro de estas proteínas funcionan por parejas (Pop5-RPP30 y RPP21-RP29). Hemos utilizado la espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN) y la calorimetría de titulación isotérmica (ITC) para caracterizar la interacción entre Pop5 y RPP30 de la arquea hipertermofílica Pyrococcus furiosus (Pfu). Las asignaciones de resonancia de la columna vertebral de la RPP30 libre (25 kDa) indican que la proteína está bien estructurada en solución, con una estructura secundaria que coincide con la observada en una estructura cristalina estrechamente relacionada. Las perturbaciones del desplazamiento químico tras la adición de Pop5 (14 kDa) revelan su superficie de unión a la RPP30. Los experimentos de ITC confirman una estequiometría neta de 1 :1 para esta estrecha interacción proteína-proteína y muestran isotermas complejas, indicativas de una unión de orden superior. De hecho, los datos de dispersión de luz y cromatografía de exclusión por tamaño revelan que el complejo existe como un heterotetrámero de 78 kDa con dos copias de Pop5 y RPP30. Estos resultados servirán de base para futuros esfuerzos por dilucidar el papel funcional del complejo Pop5-RPP30 en el ensamblaje y la catálisis de la RNasa P.

• Materias:Proteínas Metabolismo Ácido ribonucleico (ARN) Arqueas Biogénesis
• Subjects:Proteins Metabolism Ribonucleic acid (RNA) Archeas Biogenesis
• Palabras claves:interacción proteica, calorimetría de valoración isotérmica, arquea hipertermofílica pyrococcus, estructura cristalina relacionada, enzima ribonucleoproteica conservada, rnasa, resonancia magnética nuclear, resonancia de la columna vertebral de la nmr, perturbación del desplazamiento químico, datos de cromatografía de exclusión
• Keywords:protein interaction, isothermal titration calorimetry, hyperthermophilic archaeon pyrococcus, related crystal structure, conserved ribonucleoprotein enzyme, rnase, nuclear magnetic resonance, nmr backbone resonance, chemical shift perturbation, exclusion chromatography data