Resumen

Se estableció con éxito un sistema de intercambio genético sin marcadores en la cepa Gö1 de Methanosarcina mazei utilizando el gen hpt que codifica la hipoxantina fosforibosiltransferasa. En primer lugar, se generó un mutante de deleción cromosómica del gen hpt que confiere resistencia al análogo de la purina 8-aza-2,6-diaminopurina (8-ADP). Se introdujo en esta cepa el vector de intercambio alélico no replicable (pRS345) que lleva el casete de resistencia a pac para la selección directa de la integración cromosómica, y el gen hpt para la contra-selección. Mediante un evento de pop-in y finalmente pop-out del plásmido del cromosoma, se habilita el intercambio alélico. Utilizando este sistema, hemos generado con éxito un mutante de deleción de M. mazei del gen que codifica el ARN no codificante regulador sRNA154. La caracterización de M. mazeiΔsRNA154 en condiciones de limitación de nitrógeno demostró la expresión diferencial de al menos tres proteínas citoplásmicas y la reducción del crecimiento, argumentando fuertemente un papel prominente de sRNA154 en la regulación de la fijación de nitrógeno por la regulación posttranscripcional.

• Materias:Proteínas Metabolismo Ácido ribonucleico (ARN) Arqueas Biogénesis
• Subjects:Proteins Metabolism Ribonucleic acid (RNA) Archeas Biogenesis
• Palabras claves:gen hpt, vector de intercambio alélico, análogo de la purina 8-aza-2, 6-diaminopurina, sistema de intercambio genético, regulaciones del nitrógeno, papel del srna154, codificación del rna srna154, crecimiento reducido, methanosarcina mazei, integración cromosómica
• Keywords:hpt gene, allelic exchange vector, purine analog 8-aza-2, 6-diaminopurine, genetic exchange system, regulations of nitrogen, role of srna154, coding rna srna154, reduced growth, methanosarcina mazei, chromosomal integration