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Establishment and Evaluation of a Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay for Detection of Raccoon Dog in Meat MixturesEstablecimiento y evaluación de un ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle para la detección del perro mapache en mezclas de carne

Resumen

El perro mapache (Nyctereutes procyonoides) es un animal económicamente importante utilizado para la producción de pieles, pero el consumo de su carne es perjudicial para la salud humana. En la actualidad, no se dispone de ningún método rápido y sensible para detectar carne de perro mapache en mezclas cárnicas. En este estudio, desarrollamos un método de fácil aplicación, rápido y económicamente viable para identificar la presencia de perro mapache en mezclas de carne basado en la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP). Se probaron cuatro conjuntos de cebadores LAMP a diferentes temperaturas, y se determinaron los cebadores que funcionaban mejor a 62°C (conjunto 2). En el ensayo LAMP, no hubo reactividad cruzada con la carne obtenida de otras especies de animales y el límite de detección de la concentración de ADN fue de 0,1 pg-μL-1, ligeramente superior a la PCR TaqMan en tiempo real (0,01 pg-μL-1), pero la sensibilidad de 0,1 pg-μL-1 cumple con la mayoría de los requisitos de los análisis de rutina. Además, mediante el método LAMP, las mezclas de carne que contenían más del 0,5% del componente de perro mapache se detectaron directamente (sin extracción de ADN) en el sobrenadante aislado de las mezclas de carne tras realizar ciclos repetidos de descongelación y congelación de mezclas de carne picada. Nuestros resultados demuestran que el ensayo LAMP es una herramienta de detección valiosa, sencilla y sensible para la identificación de carne de perro mapache en mezclas.

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