Resumen

Este trabajo validó la técnica de PCR para la detección de L. monocytogenes a partir de ADN de cultivos puros y en muestras de leches crudas, quesos frescos, carne de res y carne de pollo. En DNA de cultivos puros la sensibilidad, la especificidad y la reproducibilidad encontrada fue de 100%, 10¹UFC/ml y K=1, respectivamente. Para la extracción del ADN de los alimentos se emplearon dos métodos, el primero, basado en la precipitación alcohólica en presencia de NaI, lo que redujo en gran medida las grasas; permitiendo la detección directa de 101 UFC/ml en leche cruda y 10⁵ UFC/g en queso fresco. El segundo método, basado en la extracción con lisozima, proteinasa K y fenol-cloroformo, permitió establecer límites de detección de 10² y 10⁴ UFC/g para las carnes de res y pollo respectivamente. La PCR se basó en la especificidad de los iniciadores LI1/U1 que amplificaron una banda de 938 pb (identificación de género) característica del rDNA 16S y los iniciadores LF/LR que amplificaron una banda de 750 pb característica del gen hlyA (identificación de especie). Los resultados de la validación reportaron con relación al método “Gold Standard” una reproducibilidad, sensibilidad y especificidad del 100% en leches crudas. Para las muestras de queso frescos se reportó una reproducibilidad de 97%, sensibilidad 96.3% y especificidad del 100%, para la carne de pollo la reproducibilidad fue 98.43%, sensibilidad 96.9%, especificidad 100%, valor predictivo positivo 100% y valor predictivo negativo 100%, para la carne de res todos los parámetros fueron 100%. El método “Gold Standard” reportó 100% para todos los parámetros. El trabajo muestra que ambas técnicas pueden ser utilizadas para detectar L. monocytogenes en este tipo de alimentos y que la PCR reduce el tiempo de ensayo considerablemente.

INTRODUCCIÓN

La listeriosis humana forma parte del grupo de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA), esta enfermedad es esporádica y la ocasiona Listeria monocytogenes. Este microorganismo se ha convertido en un problema de salud pública, y aunque la incidencia está entre 4 y 8 casos por cada 1.000.000 personas, la tasa de mortalidad es alta en comparación con otras ETAs (20 - 30%), (ONU 2000; Torres et al, 2004b). Entre las manifestaciones clínicas asociadas a listeriosis se encuentran: meningitis, encefalitis, septicemias y aborto entre otras (Torres et al., 2004b). Los grupos poblacionales más susceptibles a la enfermedad son aquellos que tienen disminuida la inmunidad celular como los recién nacidos, las mujeres embarazadas, los ancianos, los enfermos de cáncer o SIDA y personas alcohólicas.

Los alimentos tales como carne cruda y curada, leche cruda y pasteurizada, queso y vegetales (Pinner et al., 1992; Goulet, 1993; Qvist, 1994; Salvat, 1995; Ryser et al., 1996; Ryser, 1999) han sido el vehículo principal de entrada de L. monocytogenes al organismo humano (Da Silva, 1995; Boerlin et al., 1997).

• Materias:Contaminación de alimentos Control de carnes Crecimiento (Bacterias) Higiene de la leche Microbiología
• Subjects:Food contamination Meat inspection Bacterial growth Milk hygiene Microbiology
• Palabras claves:Validación; PCR múltiple; Listeria monocytogenes; Leches crudas; Quesos frescos; Carnes crudas de res y pollo
• Keywords:Validation; Pcr multiplex; Listeria monocytogenes; Raw milk; Fresh cheeses; Beef; Poultry