Resumen

Este trabajo describe estrategias de preparación de conjugados péptido-oligonucleótido que combinan el comportamiento de autoensamblaje de los oligonucleótidos de ADN con las capacidades de reconocimiento molecular de los péptidos. Las síntesis incluyen una reacción de acoplamiento de fragmentos en fase de disolución y una estrategia de acoplamiento de fragmentos en fase sólida en la que el oligonucleótido se ha inmovilizado en DEAE Sepharose. Se evalúa el rendimiento de cuatro reactivos de acoplamiento, dos reactivos en agua, EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida clorhidrato) y DMTMM (4-(4,6-dimetoxi[1,3,5]triazin-2-il)-4-metil-morfolinio cloruro), y dos en dimetilformamida (DMF), PyBOP ((Benzotriazol-1-yloxy) tripirrolidinophosphonium hexafluorophosphate) y HBTU (O-benzotriazole-N,N,N′,N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate), mientras que el fragmento de oligonucleótido se encuentra en solución o inmovilizado en DEAE. Estas estrategias de acoplamiento se basan en un enlace amino 5′ desprotegido en el oligonucleótido que reacciona con el péptido C-terminal. El péptido, seleccionado a partir de una biblioteca combinatoria por su comportamiento de unión al oro, tenía una longitud de 12 aminoácidos con una tapa acetil N-terminal. La formación de los conjugados se confirmó mediante electroforesis en gel y espectrometría de masas, mientras que la funcionalidad de reconocimiento molecular de la porción peptídica se verificó mediante microscopía de fuerza atómica. Los rendimientos en fase de solución fueron superiores a los de sus homólogos en fase sólida. El EDC produjo el mayor rendimiento tanto para las estrategias en fase de solución (95%) como en fase sólida (24%), mientras que los reactivos basados en DMF, PyBOP y HBTU, produjeron bajos rendimientos con una recuperación reducida. Todos los conjugados recuperables demostraron capacidad de templado de nanopartículas de oro.

• Materias:Ingeniería genética Ácido desoxirribonucleico (ADN) Ácido ribonucleico (ARN) Pliegue de Proteína Genómica
• Subjects:Genetic engineering Deoxyribonucleic acid (DNA) Ribonucleic acid (RNA) Protein Folding Genomics
• Palabras claves:solución, capacidad de templado de nanopartículas de oro, reacción de acoplamiento de fragmentos de fase, estrategia de acoplamiento de fragmentos de fase, microscopía de fuerza atómica, capacidad de reconocimiento molecular, funcionalidad de reconocimiento molecular, casquillo acetilo terminal, dmf, edc
• Keywords:solution, gold nanoparticle templating capability, phase fragment coupling reaction, phase fragment coupling strategy, atomic force microscopy, molecular recognition capabilities, molecular recognition functionality, terminus acetyl cap, dmf, edc