Resumen

En trabajos anteriores, informamos sobre el aislamiento y el análisis de la secuencia del genoma de la cepa tsu1 de Bacillus cereus con número de acceso JPYN00000000 del NCBI. Los 36 andamiajes del genoma tsu1 ensamblado se alinearon con el genoma de B. cereus B4264 con variaciones. En el genoma tsu1 se identificaron genes que codifican para la xilanasa y la celulasa y el grupo de genes de la vía de biosíntesis del poli-3-hidroxibutirato (PHB). La acumulación de PHB en B. cereus tsu1 se identificó inicialmente mediante tinción con negro Sudán y se confirmó después mediante cromatografía líquida de alto rendimiento. Las propiedades físicas de estos extractos de PHB, cuando se analizaron con espectros Raman y espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier, resultaron ser comparables al compuesto estándar. Los cinco genes PHB de tsu1 (phaA, phaB, phaR, phaC y phaP) se clonaron y expresaron con clonación TOPO, y las proteínas recombinantes se validaron mediante mapeo peptídico de digestión con tripsina en gel seguido de análisis de espectrometría de masas. Se observó que la E. coli BL21 (DE3) recombinante (sobre)expresando phaC acumulaba partículas de PHB. La actividad celulolítica de tsu1 se detectó utilizando el ensayo rojo Congo en placa de carboximetilcelulosa (CMC) y el desplazamiento hacia formas de CMC de bajo tamaño molecular revelado por cromatografía de permeación en gel en cultivo líquido de CMC y la identificación de una celulasa en el proteoma secretado.

• Materias:Reactores químicos - Diseño y construcción Propiedades fisicoquímicas Polimerización Ingeniería biomédica Nanoestructuras
• Subjects:Chemical reactors - Design and construction Chemicophysical properties Polymerization Biomedical engineering Nanostructures
• Palabras claves:genoma tsu1, genoma b. cereus b4264, recombinante e. coli bl21, tsu1 ncbi accession number jpyn00000000, b. cereus tsu1, cultivo líquido cmc, tinción negro sudán, cromatografía de permeación en gel, digestión con tripsina en gel, análisis de la secuencia del genoma
• Keywords:tsu1 genome, b. cereus b4264 genome, recombinant e. coli bl21, tsu1 ncbi accession number jpyn00000000, b. cereus tsu1, cmc liquid culture, sudan black staining, gel permeation chromatography, gel trypsin digestion, genome sequence analysis