Resumen

Las alteraciones en la metilación global del ADN están implicadas en diversos procesos fisiopatológicos. Se requiere el desarrollo de métodos sencillos y rápidos, pero robustos, para evaluar la metilación del ADN con el fin de facilitar su medición e interpretación en la práctica clínica. Describimos un método de electroforesis capilar altamente sensible y reproducible con detección UV para la separación y detección de citosina y metilcitosina, tras hidrólisis con ácido fórmico de ADN extraído de sangre total humana. Las muestras hidrolizadas se secaron y resuspendieron con agua y se inyectaron directamente en el capilar sin procedimientos de derivatización de la muestra. El uso de un tampón de ejecución que contenía 50 mmol/L de tampón fosfato BIS-TRIS propano (BTP) a pH 3,25 y 60 mmol/L de tampón acetato de sodio a pH 3,60 (4 : 1, v/v) permitió la identificación completa del analito en 11 min. Las pruebas de precisión indicaron una elevada reproducibilidad con un CV interensayo del 1,98% cuando se partía de 2 μg del ADN extraído. El método se probó con éxito midiendo el grado de metilación del ADN tanto en voluntarios sanos como en ADN de timo de ternera de referencia.

• Materias:Reacciones químicas Análisis cromatográfico Farmacología Análisis químico Análisis espectroquímico
• Subjects:Chemical reactions Chromatographic analysis Pharmacology Chemical test Spectrochemical analysis
• Palabras claves:l tampón acetato sódico, adn de referencia de timo de ternera, método de electroforesis capilar reproducible, grado de metilación del adn, hidrólisis del ácido fórmico, identificación completa de analitos, metilación global del adn, sangre total humana, procedimientos de derivatización de muestras, diversos procesos fisiopatológicos.
• Keywords:l sodium acetate buffer, reference calf thymus dna, reproducible capillary electrophoresis method, dna methylation degree, formic acid hydrolysis, full analyte identification, global dna methylation, human whole blood, sample derivatization procedures, various pathophysiological processes