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Artículo

Expression and Functional Analysis of Storage Protein 2 in the Silkworm, Bombyx moriExpresión y análisis funcional de la proteína de almacenamiento 2 en el gusano de seda Bombyx mori

Resumen

La proteína de almacenamiento 2 (SP2) no sólo es una importante fuente de energía para el crecimiento y desarrollo del gusano de seda, sino que también tiene efectos inhibidores sobre la apoptosis celular. La apoptosis de las células endoteliales (CE) es un importante factor que contribuye al desarrollo de la aterosclerosis; por lo tanto, el estudio de la actividad antiapoptótica de la SP2 en las CE proporciona información relacionada con el tratamiento de la aterosclerosis y otras enfermedades cardiovasculares. En este estudio, se clonó el gen sp2 y se expresó en Escherichia coli para producir una proteína de fusión marcada con 6xHis, que luego se utilizó para generar un anticuerpo policlonal. Los resultados de Western blot revelaron que los niveles de SP2 eran más altos en el estadio de pupa y en la hemolinfa de larvas de quinto estadio, pero bajos en los estadios de huevo y adulto. Los resultados de localización subcelular mostraron que SP2 se localiza principalmente en la membrana celular. Además, se utilizó un sistema Bac-to-Bac para construir un baculovirus recombinante para la expresión de SP2. A continuación, la SP2 purificada se añadió a un medio de cultivo para CE de vena umbilical humana (HUVECs), que se expusieron a estaurosporina. Un ensayo de viabilidad celular demostró que SP2 podía aumentar significativamente la viabilidad de las HUVEC. Además, tanto los resultados de ELISA como los de citometría de flujo indicaron que SP2 tiene efectos antiapoptóticos sobre la apoptosis de HUVEC inducida por estaurosporina.

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