El método desarrollado utilizó tres enzimas compuestas por colesterol esterasa, colesterol oxidasa y peroxidasa para la fabricación de un biosensor amperométrico con el fin de determinar el colesterol total en muestras de suero. Se utilizaron nanopartículas de oro (AuNPs) y nanotubos de carbono multipared carboxilados (cMWCNTs) para diseñar el núcleo del electrodo de trabajo, con ChO, ChE y HRP covalentemente inmovilizados. Finalmente, se recubrió el electrodo de trabajo con una capa de poliacrilamida para evitar la lixiviación de las enzimas. Las nanopartículas de Au sintetizadas químicamente se sometieron a microscopía electrónica de transmisión (TEM) para analizar la forma y el tamaño de las partículas. El electrodo de trabajo se sometió a FTIR y XRD. La acción combinada de AuNP y c-MWCNT mostró una mejora en la actividad electrocatalítica a un potencial muy bajo de 0,27 V. Se observó un pH de 7, una temperatura de 40°C y un tiempo de respuesta de 20 segundos, respectivamente. El biosensor muestra un amplio rango lineal de 0,5 mg/dL a 250 mg/dL (0,01 mM-5,83 mM) con un límite de detección mínimo de 0,5 mg/dL (0,01 mM). El biosensor mostró una reutilización de más de 45 veces y fue estable durante 60 días. El biosensor se probó con éxito para determinar el colesterol total en muestras de suero de forma amperométrica sin interferencias significativas de los componentes del suero.
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