Resumen

La bacteria intracelular obligada Lawsonia intracellularis causa enteritis y crecimiento deficiente en cerdos destetados. Su cultivo es difícil y el diagnóstico ante mortem se basa principalmente en técnicas como la reacción en cadena de la polimerasa. Sin embargo, los resultados falsos negativos causados por la presencia de factores inhibidores de la PCR constituyen un problema. Este estudio tenía como objetivo desarrollar y evaluar una nueva técnica, la flotación, para separar L. intracellularis de los inhibidores en las heces antes de la PCR. La técnica se evaluó comparándola con dos métodos previamente evaluados y utilizados habitualmente, la preparación mediante lisado por ebullición combinada con PCR anidada y la preparación mediante un kit comercial combinada con PCR convencional. La centrifugación de densidad continua de muestras fecales que contenían L. intracellularis sugirió que la densidad de flotación del microbio se situaba entre 1,064 y 1,077 g/mL. Se probaron varias configuraciones de flotación para lograr una separación óptima del microbio de los inhibidores y las partículas fecales. La configuración finalmente seleccionada hizo flotar L. intracellularis entero desde el lugar de aplicación en el fondo hasta la parte superior del gradiente, mientras que los componentes inhibidores permanecieron principalmente en el fondo. La PCR se realizó directamente sobre el material recuperado de la interfase superior. El método se evaluó en 116 muestras clínicas. En comparación con la preparación de muestras por ebullición combinada con la PCR anidada, se inhibieron menos muestras, pero también se identificaron menos positivos. En comparación con la preparación mediante un kit comercial combinada con PCR convencional, utilizada actualmente para el diagnóstico rutinario, se obtuvieron resultados similares. Sin embargo, el nuevo método fue comparativamente más rápido de realizar. El nuevo método, basado en la flotación de Lawsonia intracellularis combinada con la PCR convencional, era muy adecuado para el diagnóstico rutinario.

• Materias:Análisis cromatográfico Microbiología Bacteriología Micología Genética microbiana
• Subjects:Chromatographic analysis Microbiology Bacteriology Mycology Microbial genetics
• Palabras claves:PCR, PCR convencional, preparación, L. intracellularis, kit comercial, nuevo método, diagnóstico rutinario, mL. Varias configuraciones de flotación, bacteria intracelular obligada Lawsonia intracellularis, Centrifugación de densidad continua
• Keywords:PCR, conventional PCR, preparation, L. intracellularis, commercial kit, new method, routine diagnosis, mL. Several flotation setups, obligate intracellular bacterium Lawsonia intracellularis, Continuous density centrifugation