Resumen

Los proteasomas están compuestos por partículas centrales 20S (CP) de subunidades de tipo α y β que se asocian con ATPasas AAA de partículas reguladoras como los complejos de nucleotidasa activadora de proteasomas (PAN) de las arqueas. En este estudio, se investigaron las funciones y los sitios adicionales de modificación postraduccional de los proteasomas utilizando la arquea Haloferax volcanii como modelo. Indicativo de la fosforilación, las isoformas sensibles a la fosfatasa de α1 y α2 fueron detectadas por inmunoblot 2-DE. Para mapear estos y otros posibles sitios de modificación postraduccional, se purificaron los proteasomas y se analizaron por espectrometría de masas en tándem (MS/MS). Utilizando este enfoque, se mapearon varios fosfositios incluyendo α1 Thr147, α2 Thr13/Ser14 y PAN-A Ser340. También se mapearon múltiples sitios de metilación en α1, revelando así un nuevo tipo de modificación proteasomal. El estudio del papel biológico de la fosforilación de α1 y PAN-A mediante mutagénesis dirigida al sitio reveló fenotipos negativos dominantes para la viabilidad celular y/o la pigmentación de las variantes de α1, incluyendo Thr147Ala, Thr158Ala y Ser58Ala. Se purificó un homólogo de la cinasa Ser/Thr de H. volcanii Rio1p y se demostró que cataliza la autofosforilación y la fosfotransferencia a α1. Las variantes de α1 en los residuos Thr y Ser que mostraron fenotipos dominantes negativos estaban significativamente reducidas en su capacidad de aceptar grupos fosforilo de Rio1p, proporcionando así un importante vínculo entre la fisiología celular y la fosforilación proteasomal.

• Materias:Biología Metano Ácido desoxirribonucleico (ADN) Metabolismo Metabolismo (Bioquimica) Arqueas metanogénico
• Subjects:Biology Methane Deoxyribonucleic acid (DNA) Metabolism Metabolism (Biochemistry) Archeas methanogenic
• Palabras claves:fenotipo dominante negativo, modificación traslacional, espectrometría de masas en tándem, modificación de proteasomas, partículas reguladoras aaa, complejo de arqueas, homólogo de la quinasa thr, partículas atpasas aaa, pan, sitio de metilación múltiple
• Keywords:dominant negative phenotype, translational modification, tandem mass spectrometry, modification of proteasomes, regulatory particles aaa, complex of archaea, thr kinase homolog, particles aaa atpases, pan, multiple methylation site