Resumen

La proteína Med6 (Med6p) es un componente distintivo de los complejos Mediator conservados evolutivamente, y el papel genuino de Med6p en las funciones de Mediator sigue siendo esquivo. Para el análisis funcional de la Med6p de Saccharomyces cerevisiae (scMed6p), generamos una serie de mutantes scMed6p que albergaban una pequeña deleción interna. El análisis genético de estos mutantes reveló que tres regiones (aminoácidos 33-42 (Δ2), 125-134 (Δ5), y 157-166 (Δ6)) de scMed6p son necesarias para la viabilidad celular y están localizadas en regiones altamente conservadas de los homólogos de Med6. En particular, el mutante Med6p-Δ2 era apenas detectable en extractos de células enteras y en Mediator purificado, lo que sugiere una pérdida de la asociación de Mediator y una rápida degradación concurrente. En consonancia con esto, las formas recombinantes de Med6p que tienen estas mutaciones restauran parcialmente (Δ2) o no restauran (Δ5 y Δ6) los defectos transcripcionales in vitro causados por la mutación med6 sensible a la temperatura. En un ensayo de reclutamiento artificial, Mediator que contiene una Med6p de tipo salvaje fusionada con LexA o Med6p-Δ5 fue reclutado a la región del operador lexA con TBP y activó la expresión del gen reportero. Sin embargo, el reclutamiento de Med6p-Δ6 con LexA a la región operadora de lexA no produjo ni el reclutamiento de TBP ni la expresión del gen reportero. Este resultado demuestra un papel fundamental de Med6p en la función de post-reclutamiento de Mediator, que es esencial para la activación transcripcional por Mediator.

• Materias:Proteínas Toxicidad Enfermedades Diabetes Ensayo con Animales
• Subjects:Proteins Toxicity Diseases Diabetes Animal Testing
• Palabras claves:región operadora de lexa, función de med6p, expresión del gen reportero, complejo mediador conservado, pérdida del mediador, degradación rápida concurrente, ensayo de reclutamiento artificial, función del mediador, pequeña deleción interna, análisis de saccharomyces
• Keywords:lexa operator region, role of med6p, reporter gene expression, conserved mediator complex, loss of mediator, concurrent rapid degradation, artificial recruitment assay, function of mediator, small internal deletion, analysis of saccharomyces