Resumen

En Haloferax volcanii, AglD añade la hexosa final al pentasacárido ligado a N que decora la glicoproteína de la capa S. El desconocimiento del sustrato natural de la glicosiltransferasa, junto con el reto de diseñar ensayos compatibles con la hipersalinidad, ha frustrado los esfuerzos de caracterización bioquímica de la actividad de AglD. Para sortear estos obstáculos, se describe un ensayo in vivo diseñado para identificar residuos de aminoácidos importantes para la actividad de AglD. En el ensayo, la restauración de la función de AglD en una cepa de deleción de Hfx. volcanii aglD transformada para expresar versiones de AglD codificadas en plásmidos, generadas mediante mutagénesis dirigida al sitio en posiciones que codifican residuos conservados en arqueas homólogas de AglD, se refleja en el comportamiento de un reportero de N-glicosilación fácilmente detectable. Así, Asp110 y Asp112 fueron designados como elementos del motivo DXD de AglD, un motivo que interactúa con cationes metálicos asociados a donantes de azúcares activados por nucleótidos, mientras que Asp201 se predijo que era la base catalítica de la enzima.

• Materias:Biología Metano Ácido desoxirribonucleico (ADN) Metabolismo Metabolismo (Bioquimica) Arqueas metanogénico
• Subjects:Biology Methane Deoxyribonucleic acid (DNA) Metabolism Metabolism (Biochemistry) Archeas methanogenic
• Palabras claves:actividades de agld, motivo de agld, restauración de agld, versión de agld, residuos de aminoácidos, homólogos de agld, caracterización de agld, donante de azúcares activados, desafío de diseñar, posición que codifica los residuos
• Keywords:agld activities, motif of agld, restoration of agld, version of agld, amino acid residues, homologues of agld, characterization of agld, activated sugar donor, challenge of designing, position encoding residues