Resumen

El uso de IMERs (Reactores Enzimáticos Inmovilizados) como fase estacionaria acoplada a sistemas cromatográficos de alto rendimiento es un enfoque interesante en el cribado de nuevos ligandos. Además, los IMER ofrecen muchas ventajas sobre las técnicas que emplean enzimas en solución. La enzima nucleósido trifosfato difosfohidrolasa (NTPDasa-1) de Trypanosoma cruzi actúa como facilitadora de la infección del patógeno, por lo que es una buena diana en la búsqueda de inhibidores. En este trabajo, la inmovilización de la NTPDasa-1 permitió obtener ICER (Reactores Enzimáticos Capilares Inmovilizados). Se desarrolló y validó un método de cromatografía líquida para monitorizar la actividad de los ICER. Se investigaron las condiciones de aplicación de estos biorreactores y se obtuvieron excelentes resultados. La enzima se inmovilizó con éxito, como atestigua la actividad catalítica detectada en el sistema cromatográfico TcNTPDase-1-ICER. Los estudios cinéticos sobre el sustrato ATP dieron una KM de 0,317 ± 0,044 mmol-L-1, que seguía presentando una alta afinidad en comparación con en solución. Además, el ICER fue estable durante 32 días, tiempo suficiente para investigar muestras de posibles inhibidores, incluyendo especialmente el compuesto Suramin, que inhibió el 51% de la actividad enzimática a 100 µmol-L-1, lo que concuerda con los datos de la enzima en solución.

• Materias:Reacciones químicas Análisis cromatográfico Química farmacéutica Análisis químico Análisis espectroquímico
• Subjects:Chemical reactions Chromatographic analysis Chemistry pharmaceutical Chemical test Spectrochemical analysis
• Palabras claves:solución, enzima nucleósido trifosfato difosfohidrolasa, reactores enzimáticos capilares, reactores enzimáticos inmovilizados, método de cromatografía líquida, facilitador de infección patógena, icer, imers, ntpdase-1, enzima
• Keywords:solution, enzyme nucleoside triphosphate diphosphohydrolase, capillary enzyme reactors, immobilized enzyme reactors, liquid chromatography method, pathogen infection facilitator, icer, imers, ntpdase-1, enzyme