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Instrument for Label-Free Detection of Noncoding RNAsInstrumento para la detección sin etiquetas de ARN no codificantes

Resumen

Hemos creado un ensayo de unión directa sin etiquetas para la detección de ARN no codificantes. El ensayo se basa en matrices nanomecánicas en voladizo para la detección de la tensión superficial inducida por biomoléculas inmovilizadas y sus socios de interacción. Utilizamos varios medios para reducir significativamente la deriva de la lectura del cantilever que era una característica prominente en experimentos con lectura en fluido estacionario antes y después de la inyección de la muestra. Las principales mejoras se lograron centrándose en un equilibrio más rápido del sistema (por ejemplo, control de la temperatura e independencia de la difusión). Se mejoraron los protocolos experimentales para que las mediciones fueran más fáciles de usar y llevaran menos tiempo. Otras mejoras se lograron, por ejemplo, mediante el uso de obleas de cantilever recubiertas previamente de oro en comparación con las preparadas individualmente y una herramienta de análisis de datos implementada directamente como función en tiempo real del software de medición. Hemos demostrado la detección de dianas de biomarcadores específicos picomolares y podemos distinguir fácilmente dianas modificadas con desajustes de un solo nucleótido que se hibridan con menor afinidad.

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