Resumen

La dihidroorotasa (DHOasa) posee un centro metálico binuclear en el que dos iones de Zn están unidos por una lisina carbamilada postraduccionalmente. La DHOasa cataliza la ciclización reversible del N-carbamoil aspartato (CA-asp) a dihidroorotato (DHO) en el tercer paso de la vía de biosíntesis de los nucleótidos de pirimidina y es una atractiva diana para la potencial quimioterapia contra el cáncer y la malaria. Las estructuras de cristal de la DHOasa unida a un ligando muestran que el bucle flexible se extiende hacia el sitio activo cuando la CA-asp está unida (modo de bucle dentro) o se aleja del sitio activo, facilitando la liberación del producto DHO (modo de bucle fuera). La DHOasa se une al inhibidor del producto 5-fluoroorotato (5-FOA) de forma similar a la DHO. En el presente estudio, presentamos la estructura cristalina de la DHOasa de Saccharomyces cerevisiae (ScDHOase) en complejo con 5-FOA a una resolución de 2,5 Å (entrada PDB 7CA0). La ScDHOasa comparte una similitud estructural con la DHOasa de Escherichia coli (EcDHOasa). Sin embargo, nuestra estructura complejada reveló que la ScDHOasa se unió al 5-FOA de forma diferente a la EcDHOasa. El 5-FOA se ligó a los átomos de Zn en el sitio activo de la ScDHOasa. Además, la 5-FOA se unió a la ScDHOasa a través del modo loop-in. También hemos caracterizado la unión de la 5-FOA a la ScDHOasa mediante el método de mutagénesis dirigida al sitio y de enfriamiento por fluorescencia. Basándonos en estas líneas de evidencia molecular, discutimos si estos diferentes modos de unión dependen de la especie o de la cristalografía.

• Materias:Bioquímica Nanopartículas Compuestos químicos Potencial de Hidrógeno (pH)
• Subjects:Biochemistry Nanoparticles Chemical compounds Potential of hidrogen (pH)
• Palabras claves:sitio activo, escdhoasa, modo, estructura cristalina, sitio de la escdhoasa, estructura del ligando, estructura de la dhoasa, productos de liberación de la dho, métodos de enfriamiento por fluorescencia, bucle
• Keywords:active site, scdhoase, mode, crystal structure, site of scdhoase, structure of ligand, structure of dhoase, products dho release, fluorescence quenching methods, loop