Resumen

La disponibilidad de sistemas de ensamblaje in vitro para producir ARN polimerasas recombinantes (RNAPs) ofrece una de las herramientas experimentales más poderosas para investigar los mecanismos moleculares que subyacen a la función de las RNAPs, todavía relativamente poco conocidos. En los últimos años, hemos sido pioneros en la aplicación de nuevos enfoques de mutagénesis de alto rendimiento basados en robots para estudiar las relaciones estructura/función dentro de varios dominios que rodean el centro catalítico. El dominio Bridge Helix, que aparece en numerosas estructuras de rayos X como una hélice alfa de 35 aminoácidos de longitud, coordina el movimiento concertado de varios otros dominios durante la catálisis a través del acodamiento de dos bisagras moleculares discretas. Las mutaciones que afectan a estos mecanismos de repliegue tienen un efecto directo sobre la actividad catalítica específica de la RNAP y, en algunos casos, pueden duplicarla. Las simulaciones de dinámica molecular han demostrado ser excepcionalmente útiles para proporcionar información adicional y modelos detallados para explicar los movimientos estructurales subyacentes.

• Materias:Proteínas Metabolismo Ácido ribonucleico (ARN) Arqueas Biogénesis
• Subjects:Proteins Metabolism Ribonucleic acid (RNA) Archeas Biogenesis
• Palabras claves:potentes herramientas experimentales, enfoque de mutagénesis de alto rendimiento, rna arqueo recombinante, bisagra molecular discreta, actividades catalíticas específicas, hélice alfa larga, polimerasa de rna arqueo, dominio de hélice puente, simulación dinámica molecular, mecanismo molecular comprendido
• Keywords:powerful experimental tools, throughput mutagenesis approach, recombinant archaeal rna, discrete molecular hinge, specific catalytic activities, long alpha helix, archaeal rna polymerase, bridge helix domain, molecular dynamic simulation, understood molecular mechanism