Resumen

El daño en el ADN es un rasgo distintivo del cáncer, y las mutaciones y la regulación errónea de las proteínas que mantienen la fidelidad genómica están asociadas al desarrollo de múltiples tipos de cáncer. Podría decirse que las roturas de la doble cadena de ADN se consideran el tipo más nocivo de daño en el ADN. La vía de unión de extremos no homólogos (NHEJ) es uno de los mecanismos de reparación de las roturas de doble cadena del ADN, y las proteínas implicadas en NHEJ también pueden regular la replicación del ADN. Anteriormente establecimos que DNA-PKcs, una proteína NHEJ, promueve la estabilidad genómica y la viabilidad celular tras la exposición celular al estrés de replicación; queríamos discernir si otra proteína NHEJ, la ADN ligasa IV (Lig4), comparte este fenotipo. Nuestras investigaciones se centraron en células de cáncer de mama triple negativo, ya que, en comparación con el cáncer de mama no basal, Lig4 se amplifica con frecuencia, y una mayor dosis génica se asocia a una mayor expresión de Lig4. Redujimos Lig4 utilizando siRNA y confirmamos nuestro knockdown mediante qPCR y western blotting. La supervivencia celular disminuyó con la depleción de Lig4 sola, y esto se asoció con un mayor bloqueo de la horquilla de replicación. La activación y desfosforilación de la proteína de punto de control Chk1 no se modificó en las células mermadas por Lig4. La depleción de Lig4 dio lugar a una fosforilación sostenida de DNA-PKcs tras la exposición a hidroxiurea. La comprensión del efecto de Lig4 sobre la replicación genómica y la respuesta al estrés de replicación aclarará las ramificaciones biológicas de la inhibición de la actividad de Lig4. Además, Lig4 es una diana clínica atractiva para dirigir la reparación mediada por CRISPR/Cas9 hacia la reparación dirigida por homología y alejarla de NHEJ, por lo que es fundamental comprender cómo afecta la disminución de Lig4 a la biología celular.

• Materias:Ingeniería genética Genética Molecular Pliegue de Proteína Reparación del ADN Daño del ADN
• Subjects:Genetic engineering Molecular Genetic Protein Folding DNA Repair DNA Damage
• Palabras claves:lig4, roturas de doble cadena, adn, daño en el adn, depleción de lig4, proteína nhej, activación de la proteína de punto de control chk1, impacto de lig4 en la biología celular, células de cáncer de mama triple negativo, adn ligasa iv
• Keywords:lig4, double strand breaks, dna, dna damage, lig4 depletion, nhej protein, checkpoint protein chk1 activation, lig4 impacts cell biology, triple negative breast cancer cells, dna ligase iv