Resumen

Se investigó al flavonoide naringenina como posible inductor de los genes vir en la transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciens en Passiflora mollissima, P. giberti y Nicotiana tabacum cv. Xanthi. El porcentaje de eficiencia en la transformación de los explantes se evidenció en la expresión del gen gus, posterior a la inoculación de los explantes con las cepas de A. tumefaciens EHA 105 y 1065. Estas cepas contenían los genes gus y npt II. Se observó un incremento en la expresión del gen gus al suplementar el medio de co-cultivo de los explantes con el flavonoide naringenina. En los explantes de P. mollissima, al suplementar el medio de cultivo con 100 µM (cepa EHA 105) y 300 µM (cepa 1065), naringenina fue más efectivo con un incremento medio (± s.e.m., n=3) de la actividad de GUS en explantes de hoja (20.3 ± 2.4%, cepa EHA; 105; 6.0 ± 0.57%, cepa 1065) y en segmentos nodales (16.7 ± 2.4% cepa EHA 105; 8.3 ± 0.57% cepa 1065). En P. giberti y N. tabacum la actividad máxima de GUS se obtuvo en explantes de hoja y raíz con 100 µM de naringenina en ambas cepas analizadas. Cuando naringenina fue adicionada al medio de cultivo bacteriano Luria Bertani (LB) tanto la densidad óptica como el número de unidades formadoras de colonias fue mayor en relación al control. Esta es la primera vez en la cual se indica el empleo de naringenina como flavonoide que incrementa la transferencia de genes de Agrobacterium a las plantas. Los resultados sugieren que naringenin puede ser usado como alternativa frente a acetosiringona en la inducción de genes vir en Agrobacterium en experimentos de transformación.

INTRODUCCIÓN

La consecución de protocolos de transformación fiables en especies vegetales depende del establecimiento de un procedimiento de regeneración eficiente, de una alta frecuencia de transformación y de una selección óptima para regenerar las células transformadas. Esto puede obtenerse por la interacción de un gran número de factores que incluyen el genotipo de la planta, la cepa bacteriana, las condiciones externas durante el precultivo de Agrobacteria y el material vegetal durante el co-cultivo (Gheysen et al., 1998). Uno de los enfoques más comunes para aumentar la frecuencia de transformación de Agrobacterias es el uso de ciertos metabolitos (por ejemplo, acetosiringona, αhidroxiacetosiringona) durante el precultivo de las Agrobacterias y/o el cocultivo que estimulan los genes de virulencia (vir) en el plásmido inductor de tumores (Ti). Como consecuencia, varios estudios en especies de frutas leñosas han indicado el efecto beneficioso de añadir acetosiringona durante el cocultivo y/o el precultivo de Agrobacterias (James et al., 1993; Kaneyoshi et al., 1994; Cervera et al., 1998a). Aunque también se han identificado otros compuestos inductores de genes vir y están disponibles comercialmente, como la quercetina (Zerback et al., 1989), el catecol (Bolton et al., 1986), el ácido sinapínico (Melchers et al., 1989), el ácido ferúlico (Berthelot et al., 1998) y la vainillina (Stachel et al., 1985), un número limitado de protocolos de transformación mediada por Agrobacterium los han utilizado para mejorar la transformación.

• Materias:Botánica Crecimiento (Bacterias) Fitoecología Flavonoide Nutrición de las plantas Plantas Útiles
• Subjects:Botany Bacterial growth Plant ecology Flavonoid Plant nutrition Plants useful
• Palabras claves:Naringenin; Agrobacterium; Acetosyringone; Passifloras
• Keywords:Naringenina; Agrobacterium; Acetosiringona y Pasifloras