Resumen

Las arqueas halófilas mantienen concentraciones salinas intracelulares cercanas a la saturación para sobrevivir en entornos de alta salinidad y sus procesos celulares se han adaptado para funcionar en estas condiciones. Se sabe poco sobre la adaptación halófila de la maquinaria de procesamiento del ADN, lo que resulta especialmente intrigante porque las interacciones proteína-ADN son clásicamente sensibles a la sal. Para investigar dicha adaptación, hemos caracterizado la capacidad de unión al ADN de la RPA3 recombinante de Haloferax volcanii (HvRPA3). En condiciones salinas fisiológicas (3 M de KCl), HvRPA3 es monomérico y se une a un ssDNA de 18 nucleótidos con afinidad nanomolar, lo que demuestra que los RPAs que contienen la arquitectura de un solo pliegue OB/dedo de zinc se unen con una afinidad ampliamente comparable a la de los RPAs de dos pliegues OB/dedo de zinc. La reducción de la concentración de sal a 1 M de KCl induce la dimerización de la proteína, que conserva su capacidad de unirse al ADN. En el ssDNA circular, se observan dos modos de unión dependientes de la concentración. Convencionalmente, el aumento de la concentración de sal afecta negativamente a la unión al ADN, pero HvRPA3 no se une al ADN en 0,2 M de KCl, aunque la multimerización puede ocluir el sitio de unión. El único pliegue OB N-terminal es competente para unirse al ADN en ausencia del dedo de zinc C-terminal, aunque con afinidad reducida. Este estudio representa la primera caracterización cuantitativa de la unión del ADN en una proteína halófila en concentraciones salinas extremas.

• Materias:Bioquímica Ácido ribonucleico (ARN) Arqueas Biogénesis
• Subjects:Biochemistry Ribonucleic acid (RNA) Archeas Biogenesis
• Palabras claves:adn, condiciones salinas fisiológicas, primera caracterización cuantitativa, modo de unión dependiente, hvrpa3, concentración salina extrema, arquitectura de los dedos de unión, kcl, caracterización del adn, aumento de la concentración salina
• Keywords:dna, physiological salt conditions, first quantitative characterisation, dependent binding mode, hvrpa3, extreme salt concentration, finger architecture bind, kcl, characterisation of dna, increased salt concentration