Resumen

La vía de señalización Wnt se ha asociado a muchos procesos celulares esenciales. Este estudio pretende examinar los efectos de la señalización Wnt en la proliferación de células HEK293T cultivadas. Las células se incubaron con Wnt3a, y la activación de la vía Wnt se siguió mediante el análisis del nivel de la proteína β-catenina y de los niveles de expresión de los genes diana MYC y CCND1. El nivel de proteína β-catenina aumentó hasta cuatro veces. Mientras que los niveles de ARNm de c-Myc y ciclina D1 aumentaron ligeramente, los niveles de proteína aumentaron hasta 1,5 veces. Sorprendentemente, los ensayos MTT y BrdU mostraron resultados diferentes al medir la tasa de proliferación de las células HEK293T estimuladas por Wnt3a. En los ensayos con BrdU se pudo detectar un aumento de la tasa de proliferación, que se correlacionaba con la concentración de Wnt3a aplicada. Por el contrario, esta correlación no pudo demostrarse en los ensayos MTT. Los resultados del MTT, que se basan en la actividad mitocondrial, se confirmaron mediante el análisis del complejo succinato deshidrogenasa por inmunofluorescencia y por Western blotting. En conjunto, nuestro estudio demuestra que Wnt3a activa la proliferación de las células HEK293. Estos efectos pueden detectarse midiendo la síntesis de ADN en lugar de medir los cambios de la actividad mitocondrial.

• Materias:Biología molecular Proliferación celular Biología celular Hialuronano Sintasas Transducción de Señal
• Subjects:Molecular biology Cell proliferation Cell biology Hyaluronan Synthases Signal Transduction
• Palabras claves:Ensayos BrdU, proteína catenina, actividad mitocondrial, tasa de proliferación, células HEK293T cultivadas, muchos procesos celulares esenciales, células HEK293T, complejo succinato deshidrogenasa, genes diana MYC, Wnt.
• Keywords:BrdU assays, catenin protein, mitochondrial activity, proliferation rate, cultured HEK293T cells, many essential cell processes, HEK293T cells, succinate dehydrogenase complex, target genes MYC, Wnt