Resumen

La conjugación de ARNsi con macromoléculas como la albúmina sérica tiene múltiples ventajas potenciales, entre ellas una mayor extravasación a través de la transcitosis mediada por albúmina a través de las células endoteliales y un menor aclaramiento renal. Para intentar conjugar el siRNA con la albúmina, utilizamos siRNA modificado con aminas de origen comercial y lo hicimos reaccionar con el enlazador heterobifuncional succinimidil 4-[N-maleimidometil]ciclohexano-1-carboxilato (SMCC) para introducir un grupo maleimida adecuado para la conjugación con el grupo tiol del residuo de cisteína expuesto a la superficie (Cys 34) dentro de la albúmina. Descubrimos que la conjugación del ARNsi tratado con SMCC con la albúmina sérica bovina (BSA) era muy ineficiente e investigamos la causa del bajo rendimiento del conjugado. La ultrafiltración con solución salina tamponada con fosfato antes de la activación con SMCC aumentó drásticamente el rendimiento del conjugado siARN-albúmina (~15 veces). La comunicación con el proveedor comercial reveló que se utilizaba tampón de acetato de amonio en un paso de desalinización como parte del proceso de purificación del siARN antes del suministro, lo que probablemente daba lugar a contraiones de amonio en el polianión de siARN, que interferirían con la conjugación al consumir el SMCC. Tras la ultrafiltración, se pudo utilizar una cantidad muy reducida de SMCC para afectar a la conjugación, sin reducción significativa del rendimiento. Estos datos indican que el ARNsi modificado con aminas de origen comercial puede requerir ultrafiltración o diálisis antes de su uso en reacciones de conjugación.

• Materias:Ingeniería genética Ácido desoxirribonucleico (ADN) Ácido ribonucleico (ARN) Pliegue de Proteína Genómica
• Subjects:Genetic engineering Deoxyribonucleic acid (DNA) Ribonucleic acid (RNA) Protein Folding Genomics
• Palabras claves:sirna, smcc, conjugación, albúmina, albúmina sérica, enlazador heterobifuncional succinimidil 4-[n, tampón acetato de amonio, múltiples beneficios potenciales, proceso de purificación de sirna, amina
• Keywords:sirna, smcc, conjugation, albumin, serum albumin, heterobifunctional linker succinimidyl 4-[n, ammonium acetate buffer, multiple potential benefits, sirna purification process, amine