Los métodos tradicionales de estudio de los organismos acuáticos pueden ser difíciles, largos y destructivos para el hábitat. Algunos métodos son invasivos y pueden ser perjudiciales para las especies objetivo. El uso de ADN ambiental (ADNe) ha demostrado su eficacia en la detección de macroorganismos acuáticos de baja densidad de población. En este estudio se ha perfeccionado la técnica para realizar estudios a escala estatal. La presencia del hellbender se identificó mediante el uso de cebadores específicos (gen citocromo b) para detectar ADNe en muestras de agua recogidas en ríos, arroyos y riachuelos de Ohio y Kentucky con registros históricos del hellbender oriental (Cryptobranchus a. alleganiensis). Se describen dos protocolos de muestreo; ambos redujeron significativamente la cantidad de agua necesaria para la recogida con respecto a la recogida de 6 L descrita anteriormente. Las muestras de dos litros resultaron adecuadas para detectar la presencia de hellbender en cursos de agua naturales en los que se habían estudiado anteriormente tanto en Ohio como en Kentucky; las muestras de 1 L no resultaron fiables. El ADN extraído de 3 L de agua recogida en múltiples filtros (1 L/filtro) pudo combinarse y concentrarse mediante precipitación con etanol, lo que favoreció la amplificación del ADN de hellbender y redujo drásticamente el tiempo de filtración. Este método mejora la eficacia y las implicaciones para el bienestar de los métodos de muestreo de especies acuáticas reclusivas de baja densidad de población para estudios de ámbito estatal que impliquen la recogida en múltiples cuencas hidrográficas.
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