Resumen

La inmovilización de elementos de reconocimiento de aptámeros de ácidos nucleicos seleccionados libres en solución en la superficie de plataformas de biosensores ha demostrado ser un reto. En este estudio se investigó la unión de múltiples pares aptámero/destino inmovilizados en una micromatriz disponible en el mercado como sistema modelo que imita las aplicaciones de los biosensores. Los resultados indican que una distancia mínima (longitud del enlazador) de la superficie y el enlazador de timina nucleobase proporcionan una unión reproducible en condiciones variables. Un método de marcaje indirecto, en el que la diana se marcó con una biotina seguida de una breve incubación Cy3-estreptavidina, proporcionó una mayor relación señal-ruido y más de dos órdenes de magnitud de mejora en el límite de detección, en comparación con el marcaje directo Cy3-proteína. También demostramos que las afinidades de la interacción aptámero/objetivo pueden cambiar entre el marcaje directo e indirecto y que las condiciones para optimizar la mayor intensidad de fluorescencia aumentarán la sensibilidad del ensayo pero no cambiarán la afinidad global. Además, algunas secuencias que inicialmente no se unían demostraron que sí lo hacían cuando se optimizaron las condiciones. Estos resultados, junto con los estudios que demostraron una mayor unión en tampones no selectivos, permitieron comprender mejor la estructura y la afinidad de los aptámeros, fundamentales para las aplicaciones de biosensores, y generalizar las condiciones iniciales para los investigadores que deseen estudiar los aptámeros en una superficie de microarrays.

• Materias:Genes Genética Molecular Estrés oxidativo Genómica Ácidos nucleicos
• Subjects:Genes Molecular Genetic Oxidative stress Genomics Nucleic acids
• Palabras claves:condiciones, unión, aplicaciones de biosensores, elementos de reconocimiento de aptámeros de ácidos nucleicos, mayor intensidad de fluorescencia, método de etiquetado indirecto, enlazador nucleobase timina, aptámeros, resultados, superficie
• Keywords:conditions, binding, biosensor applications, nucleic acid aptamer recognition elements, highest fluorescence intensity, indirect labeling method, thymine nucleobase linker, aptamers, results, surface