Resumen

Anteriormente hemos utilizado sustratos peptídicos híbridos con puntos cuánticos semiconductores (QD) para monitorizar la proteólisis enzimática. En este informe, ampliamos esta estrategia de detección para supervisar aún más las interacciones proteína-proteasa. Utilizamos QDs autoensamblados con múltiples copias de proteínas marcadas con colorantes como sustratos para la detección de la actividad de las proteasas. La detección de la proteólisis se basa en los cambios en la tasa de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) entre los QDs y las proteínas proximales marcadas con colorante tras la digestión de la proteína por la enzima añadida. Nuestro estudio se centró en dos enzimas proteolíticas representativas: la cisteína proteasa papaína y la serina proteasa endoproteinasa K. El análisis de la digestión enzimática nos permitió estimar valores mínimos para las actividades enzimáticas de cada enzima utilizada. También se dedujeron mecanismos de inhibición enzimática a partir de los datos de FRET recogidos en presencia de inhibidores. Las aplicaciones potenciales de esta tecnología incluyen ensayos de descubrimiento de fármacos y monitorización celular in vivo de la actividad enzimática.

• Materias:Redes de sensores Nanosensores Sensores electroquímicos Biosensores
• Subjects:Sensor networks Nanosensors Electrochemical sensors Biosensors
• Palabras claves:transferencia de energía por resonancia de fluorescencia, punto cuántico semiconductor híbrido-, análisis de serina proteasa endoproteinasa k., cisteína proteasa papaína, ensayos de descubrimiento de fármacos, enzimas proteolíticas representativas, seguimiento celular vivo, enzima, proteínas, datos de traste
• Keywords:fluorescence resonance energy transfer, hybrid semiconductor quantum dot-, serine protease endoproteinase k. analysis, cysteine protease papain, drug discovery assays, representative proteolytic enzymes, vivo cellular monitoring, enzyme, proteins, fret data