Resumen

Se desarrolló una nueva clase de nanobiosensor integrando un fragmento AluI de 27 nucleótidos del gen del citocromo b (cytb) porcino a una nanopartícula de oro (GNP) recubierta de citrato-tanato de 3 nm de diámetro. El biosensor detectó 0,5 y 1% de carne de cerdo en mezclas binarias de carne de cerdo-carne de vacuno cruda y esterilizada en autoclave durante 2,5 h en un solo paso sin separación ni lavado. Se estudió la cinética de hibridación del sensor híbrido con dianas de carne de cerdo sintéticas y reales digeridas por AluI, desde concentraciones de diana moderadas a extremas, y se halló una relación sigmoidal. Utilizando la curva cinética, se desarrolló un método conveniente para cuantificar y contar el número de copias de ADN diana. La precisión del método fue superior al 90 en mezclas binarias de carne de cerdo-carne de vacuno cruda y esterilizada en autoclave en un intervalo de adulteración de la carne de cerdo del 5-100%. La sonda del biosensor identificó una secuencia de ADN diana que era varias veces más corta que una típica plantilla de PCR. Esto permitió la detección y cuantificación de objetivos potenciales en muestras altamente procesadas o degradadas en las que la amplificación PCR no era posible debido a la crisis de la plantilla. El ensayo fue un enfoque alternativo viable de qPCR para detectar, cuantificar y contar el número de copias de secuencias de ADN de tamaño más corto para abordar un problema biológico de amplio alcance en la industria alimentaria, laboratorios de diagnóstico y medicina forense.

• Materias:Biotecnología Análisis electroquímico Nanopartículas Nanocompuestos Nanocables
• Subjects:Biotechnology Electrochemical analysis Nanoparticles Nanocomposites Nanowires
• Palabras claves:cerdo autoclavado, mezclas binarias, secuencias de adn de tamaño más corto, número de copias de adn objetivo, nanopartícula de oro recubierta, concentraciones objetivo extremas, citrato de nm de diámetro, fragmento de nucleótido alui, objetivos reales de cerdo, citocromo b porcino
• Keywords:autoclaved pork, binary admixtures, shorter size dna sequences, target dna copy number, coated gold nanoparticle, extreme target concentrations, nm diameter citrate, nucleotide alui fragment, real pork targets, swine cytochrome b