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DNA Nanotweezers with Hydrolytic Activity for Enzyme-Free and Sensitive Detection of Fusion Gene via Logic OperationNanopinzas de ADN con actividad hidrolítica para la detección sensible y sin enzimas de genes de fusión mediante funcionamiento lógico

Resumen

La fusión de genes es un acontecimiento molecular que se produce en la proliferación y diferenciación celular, y la aparición de genes de fusión irregulares da lugar a diversas enfermedades malignas. Por lo tanto, la detección de genes de fusión con un alto rendimiento es una tarea importante para integrar la información sobre enfermedades individuales. Hemos propuesto un sistema de ensayo fluorescente no enzimático y de alto rendimiento para la detección del gen de fusión empleando nanopinzas de ADN con actividad hidrolítica. Estas pinzas se ensamblaron mediante tres ADN monocatenarios y se diseñaron con elementos sensores y subunidades informadoras. En ausencia del gen de fusión, la pinza permanecía abierta e inactiva, por lo que no emitía ninguna señal. Sin embargo, la adición de genes de fusión provocaría alteraciones en la estructura de la pinza, que pasaría de estar abierta a estar cerrada, y una mayor activación de la DNAzima con el ensamblaje de dos subunidades informadoras. A continuación, la DNAzima activada catalizaba sustratos fluorescentes para la conversión de la señal. Tomando como ejemplo el gen de fusión BCR/ABL, el sistema de ensayo basado en pinzas mostró no sólo una excelente capacidad de distinción hacia diferentes dianas de entrada, sino también una alta sensibilidad con un límite de detección de 5,29 pM. Además de un buen rendimiento de detección, este sistema era sencillo y libre de enzimas, ofreciendo una potente herramienta nanométrica como nanodispositivo inteligente para la detección de la fusión.

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