Resumen

Las sondas para monitorizar la expresión de ARNm in vivo son de gran interés para el estudio de problemas biológicos y biomédicos, pero los avances se han visto obstaculizados por la escasa relación señal/ruido y los medios eficaces para introducir las sondas en células vivas. En este trabajo se presenta una sonda fluorescente activada por desplazamiento de la cadena PNA-DNA que permite obtener imágenes de la expresión de ARNm de la iNOS (óxido nítrico sintasa inducible), un marcador de inflamación. La sonda consiste en un PNA antisentido marcado con fluoresceína y unido a un ADN más corto marcado con DABCYLplus que apaga la fluorescencia, pero cuando el ARNm diana desplaza la cadena de temple, se restablece la fluorescencia. El ADN se utilizó para la cadena de quencher para facilitar la unión electrostática de la cadena de PNA de otra manera netural a una nanopartícula catiónica shell reticulado knedel-como (cSCK) que puede entregar la sonda dúplex PNA-ADN en las células con menos toxicidad y mayor eficiencia que otros agentes de transfección. Las células de macrófagos de ratón RAW 264.7 transfectadas con la sonda de ADN-PNA de la iNOS mediante la cSCK mostraron un aumento de 16 a 54 veces en la fluorescencia media por célula tras la estimulación de la iNOS. El aumento fue de 4 a 7 veces mayor que el de una sonda no complementaria, validando así la capacidad de una sonda activada por desplazamiento de la cadena de PNA-DNA para obtener imágenes de la expresión de ARNm in vivo.

• Materias:Genética molecular Ácido ribonucleico (ARN) Genómica Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Ácidos nucleicos
• Subjects:Molecular genetics Ribonucleic acid (RNA) Genomics Polymerase chain reaction Nucleic acids
• Palabras claves:desplazamiento de la hebra de adn-pn, expresión de mrna, hebra quencher, óxido nítrico sintasa inducible, sonda dúplex de adn-pn, sonda de adn-pn inos, células macrófagas de ratón, hebra de adn netural, otros agentes de transfección, adn
• Keywords:pna·dna strand displacement, mrna expression, quencher strand, inducible nitric oxide synthase, pna·dna duplex probe, inos pna·dna probe, mouse macrophage cells, netural pna strand, other transfection agents, dna