Resumen

Se describe un sistema que permite la síntesis eficiente de proteínas in vitro a alta temperatura. Se basa en el uso de un lisado celular no fraccionado (S30) de Sulfolobus solfataricus previamente bien caracterizado en nuestro laboratorio para la traducción de ARNm pretranscritos, y ahora adaptado para realizar la transcripción y traducción acopladas. El elemento esencial de este sistema de expresión es un fuerte promotor derivado del gen codificador del ARNr 16S/23S de S. solfataricus, a partir del cual se pueden transcribir ARNm específicos con alta eficiencia. Se informa de la síntesis de dos proteínas diferentes, incluida la proteína ADN-alquilguanina-ADN-alquil-transferasa de S. solfataricus (SsOGT), que se demuestra que se puede marcar con éxito con sustratos fluorescentes apropiados y visualizar en extractos celulares. La simplicidad del procedimiento experimental y la actividad específica de las proteínas ofrecen una serie de posibilidades para el estudio de las relaciones estructura-función de las proteínas.

• Materias:Análisis de suelos Agua Técnica In Vitro Arqueas metanogénico
• Subjects:Soil testing Water In Vitro Technique Archeas methanogenic
• Palabras claves:traducción de pretranscritos, sustrato fluorescente adecuado, lisado celular no fraccionado, síntesis de proteínas, estudio de la estructura, número de posibilidad, relación de proteínas, diferentes proteínas, alta temperatura, sulfolobus solfataricus
• Keywords:translation of pretranscribed, appropriate fluorescent substrate, unfractionated cell lysate, synthesis of protein, study of structure, number of possibility, relationship of protein, different protein, high temperature, sulfolobus solfataricus